[发明专利]一种促进麻疯树外植体再生不定芽的方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物生物技术领域，具体地，涉及一种促进麻疯树外植体再生不定芽的方法。 

背景技术

伴随着全球对化石燃料的需求日益增长，存储的化石燃料即将耗尽，人们越来越关注可再生的生物柴油。在可产生生物柴油的候选植物中，属于大戟科的麻疯树（Jatroha curcas L.）具有明显的优势，它的种子含油量高，种仁含油量可达40%~60% ，同时，麻疯树油中含有活性成分多，如毒蛋白、麻疯酮等有着重要的农药和医药价值。 

然而，大力推广麻疯树的种植却面临一系列问题，虽然麻疯树种子中含油量高，但种子产量不高；种油中活性成分多，但仍需要改变油的成分才能直接替代化石燃料；麻疯树对环境要求较高，耐寒能力弱，分布区域较窄。麻疯树属包括175个种，可以通过种间杂交引入优良性状，但所需周期长，不能够获得特异的外源基因，故主要通过基因转化改变遗传背景。高频率的植株再生体系是基因转化的基础。 

麻疯树外植体根据来源不同可以分为不同的类型。从成年麻疯树植株上直接获得叶片、叶柄经处理后可以得到成年植株叶片外植体、成年植株叶柄外植体。将麻疯树种子进行无菌培养得到的无菌苗，从无菌苗上得到无菌下胚轴、无菌子叶叶片和无菌子叶叶柄，经处理后可以得到无菌下胚轴外植体、无菌子叶叶片外植体和无菌子叶叶柄外植体。将麻疯树种子经常规培育、萌发得到的萌发苗，从萌发苗上可以得到下胚轴和真叶叶柄，经处理后可以得到种子苗下胚轴外植体和真叶叶柄外植体。 

现有技术中诱导麻疯树外植体再生不定芽时，通常是在麻疯树外植体不定芽再生培养基中添加细胞分裂素，而最常用的细胞分裂素为6-苄氨基腺嘌呤（6-BA），浓度为1~2 mg/l；6-糠氨基嘌呤（6-KT），浓度为0.1~1.0 mg/l或苯基噻二唑基脲（TDZ），浓度为0.05~0.5 mg/l。在这种条件下叶柄外植体的不定芽再生效率很低，芽体的质量也较差。同时，这些再生体系均存在周期长（80 d以上）、再生率不高的问题，严重制约了麻疯树遗传转化研究的开展。 

发明内容

本发明为了克服现有技术麻疯外植体再生不定芽时再生率低、再生芽体质量差、再生周期长的缺陷，提供一种促进麻疯树外植体再生不定芽的方法。所述方法简便，可以显著缩短整个培养周期，而且通过所述的方法可以得到数量更多、质量更好的不定芽。 

本发明通过以下技术方案予以实现上述目的： 

一种促进麻疯树外植体再生不定芽的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.获得麻疯树外植体；

    S2.将步骤S1中的麻疯树外植体用10~60 mg/l苯基噻二唑基脲（TDZ）溶液浸泡处理5~40 min；

S3.将步骤S2处理后的麻疯树外植体以横放方式接种至无激素的培养基上培养；

    所述横放方式为将外植体的横切面与培养基的水平表面相垂直；

所述麻疯树外植体为成年植株叶片外植体、无菌下胚轴外植体、无菌子叶叶片外植体、无菌子叶叶柄外植体、种子苗下胚轴外植体或真叶叶柄外植体。

麻疯树外植体根据来源不同可以分为不同的类型。从成年麻疯树植株上直接获得叶片、叶柄经处理后可以得到成年植株叶片外植体、成年植株叶柄外植体。将麻疯树种子进行无菌培养得到的无菌苗，从无菌苗上得到无菌下胚轴、无菌子叶叶片和无菌子叶叶柄，经处理后可以得到无菌下胚轴外植体、无菌子叶叶片外植体和无菌子叶叶柄外植体。将麻疯树种子经常规培育、萌发得到的萌发苗，从萌发苗上可以得到下胚轴和真叶叶柄，经处理后可以得到种子苗下胚轴外植体和真叶叶柄外植体。 

    优选地，所述无菌下胚轴外植体用20 mg/l苯基噻二唑基脲溶液浸泡处理20 min。 

    优选地，所述成年植株叶片外植体或无菌子叶叶片外植体用20 mg/l苯基噻二唑基脲溶液浸泡处理40 min。 

优选地，所述无菌子叶叶柄外植体或真叶叶柄外植体用20 mg/l苯基噻二唑基脲溶液浸泡处理20 min。