[发明专利]一种抗骨增生片的定性定量检测方法

说明书

技术领域

本发明属于中药技术领域，具体涉及一种抗骨增生片的质量控制方法。

背景技术

抗骨增生片由熟地黄、鹿衔草、骨碎补、鸡血藤、淫羊藿、肉苁蓉、莱菔子组成，具有补肾，活血、止痛之功效，用于肥大性脊椎炎，颈椎病，跟骨刺，增生性关节炎，大骨节病。该产品的质量标准收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂第7册，标准编号WS₃-B-1338-93，该标准中仅有鸡血藤显微鉴别方法，没有任何定性定量检测方法，不利于控制抗骨增生片的产品质量。现代食品与药品杂志2006年第16卷第2期《抗骨增生片质量标准研究》记载了抗骨增生片质量控制方法，对骨碎补、鸡血藤进行了定性鉴别，对淫羊藿苷进行了含量测定，其定性方法操作复杂且所用试剂毒性较大。海峡药学2007年第19卷第6期《抗骨增生片的质量标准研究》记载了抗骨增生片质量检测方法，对肉苁蓉、淫羊藿进行了定性鉴别，对淫羊藿苷进行了含量测定，其质控方法操作繁琐。中国实验方剂学杂志第12卷第7期《抗骨增生丸的定性定量方法研究》记载了抗骨增生丸定性定量检测方法，对鸡血藤、骨碎补进行了定性鉴别，对淫羊藿苷和松果菊苷进行了含量测定，其定性方法操作复杂且所用试剂毒性较大。现有质量标准不能有效的控制抗骨增生片的质量，从而将影响该产品的质量水平及其临床疗效。

发明内容

本发明的目的在于：提供一种抗骨增生片的定性定量检测方法。本发明针对现有控制标准的不足，对抗骨增生片的质量控制方法进行了研究，在原部颁标准的基础上增加了：（1）采用薄层色谱法，以柚皮苷为对照，鉴别抗骨增生片中含有骨碎补；以鸡血藤对照药材为对照，鉴别抗骨增生片中含有鸡血藤；以淫羊藿苷为对照，鉴别抗骨增生片中含有淫羊藿；（2）采用高效液相色谱法测定抗骨增生片中淫羊藿苷的含量，本发明方法提高了抗骨增生片的质量控制水平，从而保证了该药品的质量和临床疗效。

本发明是这样实现的：

一种抗骨增生片的定性定量检测方法，包括鸡血藤的显微鉴别，还包括：①薄层色谱法，以柚皮苷为对照，鉴别抗骨增生片中含有骨碎补；以鸡血藤对照药材为对照，鉴别抗骨增生片中含有鸡血藤；以淫羊藿苷为对照，鉴别抗骨增生片中含有淫羊藿；②采用高效液相色谱法测定抗骨增生片中淫羊藿苷的含量，所述定性定量检测方法包含如下步骤：

（1）取本品，置显微镜下观察：石细胞圆形或椭圆形、长方形或多角形，壁厚，胞腔含橙红色或棕色物。

（2）取本品，研细，加石油醚（60～90℃），加热回流，放冷，滤过，滤液备用。残渣加乙酸乙酯，加热回流，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取淫羊藿苷和柚皮苷对照品，分别加甲醇制成溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述三种溶液各5~10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲醇-水=5~15∶0.5~1.5∶0.5~1.5∶0.5~1.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

（3）取上述石油醚提取液，挥干，残渣加乙酸乙酯使溶解，作为供试品溶液；另取鸡血藤对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述两种溶液各5~20μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚（30～60℃）-乙酸乙酯=9.5~28.5∶2.5~7.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯（365nm）下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

    （4） 含量测定： 照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥD)测定；  

     色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.05~0.3%甲酸溶液=20~35∶80~65为流动相；检测波长为260~280nm；流速为0.5~1.0mL/min；柱温25~35℃；理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于3000；

     对照品溶液的制备：取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加70%乙醇制成每1ml含60μg的溶液，即得。