[发明专利]一种杂交瘤细胞株、其产生的抗无色孔雀石绿单克隆抗体及应用

说明书

技术领域

本发明属于免疫化学技术领域，具体涉及一种杂交瘤细胞株、抗无色孔雀石绿单克隆抗体。 

背景技术

无色孔雀石绿（leucomalachite green,LMG）是孔雀石绿（malachite green，MG）在生物体内的主要代谢残留物，对人类有致癌危险。 

孔雀石绿又称苯胺绿、维多利亚绿和中国绿，是一种带有金属光泽的绿色结晶体，属三苯甲烷类染料。孔雀石绿作为抗真菌剂，抗外生性寄生虫药和消毒剂被广泛使用于鱼药养殖业中。 

近年来发现孔雀石绿特别是其代谢物在水产体内有明显的蓄积残留现象，残留时间也较长。由于其化学官能团三苯甲烷是一种致癌物质，所以国外一些发达国家，如欧盟、美国已宣布禁止其在经济鱼类（观赏鱼除外）养殖过程中使用。我国在农业行业标准《NY5071-2002无公害食品鱼药使用准则》中明确规定所有可食组织中禁用孔雀石绿。国内外检测孔雀石绿主要采用色谱技术（HPLC）检测，虽然灵敏、定量准确，但大批量检测时速度慢，成本相对较高。以竞争性酶联免疫法（ELISA）为代表的快速筛选法事免疫学主流技术，快速、成本低、可以大批量检测。但是现有技术中，缺乏效价高、特异性强的抗无色孔雀石绿的单克隆抗体。 

发明说明 

本发明的目的是针对现有技术存在的缺点，提供一种产生抗无色孔雀石绿单克隆抗体的杂交瘤细胞株2E9，该杂交瘤细胞株能够稳定、高效的分泌抗无色孔雀石绿单克隆抗体。 

本发明的另一目的是提供所述杂交瘤细胞株产生的抗无色孔雀石绿单克隆抗体，该单克隆抗体对无色孔雀石绿的亲和力和灵敏度高，特异性高，效价高，与无色孔雀石绿的结构类似物无交叉反应。 

本发明的目的是通过以下技术方案实现的： 

一种产生抗无色孔雀石绿单克隆抗体的杂交瘤细胞株2E9，其保藏号为CGMCC No.7954。 

所述杂交瘤细胞株2E9分泌的抗无色孔雀石绿单克隆抗体。 

所述抗无色孔雀石绿单克隆抗体在制备检测无色孔雀石绿的酶联免疫试剂盒中的应用。 

所述抗无色孔雀石绿单克隆抗体在制备检测无色孔雀石绿的胶体金试纸条方面的应用。 

一种检测无色孔雀石绿的酶联免疫试剂盒，含有所述抗无色孔雀石绿单克隆抗体。 

用于检测无色孔雀石绿的胶体金试纸条，含有所述抗无色孔雀石绿单克隆抗体。 

本发明将无色孔雀石绿的结构进行了改造，得到了半抗原，再与载体蛋白偶联合成了免疫原和包被原，该方法简单，免疫效果好。通过筛选，得到了杂交瘤细胞株2E9，能够高效、稳定分泌抗无色孔雀石绿单克隆抗体，并且该单克隆抗体的效价高、特异性好、敏感性高，与无色孔雀石绿的结构类似物无交叉反应。该抗无色孔雀石绿单克隆抗体能够大量生产，可用于制备检测无色孔雀石绿的酶联免疫分析法试剂盒、胶体金试纸条等免疫学检测试剂，达到快速且灵敏地检测水产品，饲料等食品中的无色孔雀石绿药物残留的效果。 

附图说明

图1各合成抗原的SDS-PAGE电泳图，其中M：蛋白分子量标准；1：BSA；2、HSA；3：LMG-BSA；4：LMG-HSA；5：OVA；6：LMG-OVA。 

图2纯化后抗无色孔雀石绿单克隆抗体2E9’的SDS-PAGE电泳图，泳道M：蛋白质分子量Markers；泳道1：抗无色孔雀石绿单克隆抗体2E9’。 

图3抗无色孔雀石绿单克隆抗体2E9’亚型鉴定图。 

图4抗无色孔雀石绿单克隆抗体2E9’与无色孔雀石绿标准品反应的标准曲线图。 

保藏信息： 

参椐的生物材料（株）：2E9； 

分类命名：抗无色孔雀石绿单克隆抗体的杂交瘤细胞株； 

保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC）， 地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所； 

保藏号为CGMCC No.7954，保藏日期为：2013年7月12日。 

具体实施方式