[发明专利]高灵敏度的三磷酸腺苷检测方法

权利要求书

1.一种高灵敏度的三磷酸腺苷检测方法，其特征在于，其包括以下步骤：

步骤一，制备氨基化磁性纳米粒子；

步骤二，制备固定化三磷酸腺苷检测酶系统；

步骤三，对配置好的三磷酸腺苷检测酶系统进行预处理，清除酶系统中残留的三磷酸腺苷；

步骤四，使用MPI-B化学发光检测仪进行三磷酸腺苷测定。

2.如权利要求1所述的高灵敏度的三磷酸腺苷检测方法，其特征在于，所述步骤一具体包括以下步骤：将10g 1,6-己烷二胺、5g 无水醋酸钠、4g FeCl₃·6H₂O 作为铁源在15ml 乙二醇中恒温50℃剧烈搅拌；反应完毕后，将上述溶液转移到特氟龙反应釜中，在200℃下加热10h；待上述反应结束，对反应釜中的磁性纳米粒子外加磁场，同时倾去未被磁力吸附的溶液，加入适量去离子水对磁性纳米粒子清洗2~3次后，用无水乙醇清洗2~3次，最终可得25nmMNPs 的磁性纳米粒子。

3.如权利要求1所述的高灵敏度的三磷酸腺苷检测方法，其特征在于，所述步骤二具体包括以下步骤：取25%戊二醛与氨基化磁性纳米粒子以4:1的比例混合，在恒温30℃下孵育2个小时，待戊二醛与氨基化磁性纳米粒子结合完毕，用pH7.4的PBS缓冲液清洗2至3次，加入pH7.4的PBS缓冲液，在0℃冰浴下反应6小时使三磷酸双磷酸酶与已连接上羧基的磁性纳米粒子结合，浓度为4U/mL，将三磷酸双磷酸酶固定在磁性纳米粒子上，用去离子水清洗固定化酶，洗去未被固定的三磷酸双磷酸酶，得到固定化三磷酸双磷酸酶。

4.如权利要求1所述的高灵敏度的三磷酸腺苷检测方法，其特征在于，所述步骤三具体包括以下步骤：将固定化三磷酸酶加入已经配置好的荧光素酶-荧光素系统，确保固定化三磷酸双磷酸酶比例为6:7，在30℃下恒温震荡反应20min，此时溶液中固定化三磷酸双磷酸酶分解溶液中残存的ATP生成AMP和Pi；待反应结束后，在恒温4℃环境下，外加磁场，将溶液中固定化腺苷三磷酸双磷酸酶分离，将预处理后的ATP检测酶系统缓慢倾斜倒出，用于后续检测。