[发明专利]一种确定蚯蚓中土霉素残留浸提剂的实验方法

说明书

技术领域

本发明属于环境分析化学领域，具体涉及一种确定蚯蚓中土霉素残留浸提剂的实验方法。 

背景技术

土霉素属于四环素类抗生素的一种，具有十二氢化并四苯基结构，是由放线菌产生的一种广谱性抗生素，对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、厌氧菌等均具有抗性。 

我国是抗生素使用大国，其中土霉素是生产量和使用量比较高的抗生素之一。据统计，2000年我国仅土霉素产量1万吨，占世界总产量的65%，参见：胡冠九、王冰、孙成. 高效液相色谱法测定环境水样中5种四环素类抗生素残留[J]. 环境化学, 2007, 26(1), 106-107。土霉素主要用于畜禽养殖业，然而高达90-95%的土霉素残留在畜禽粪便中，参见：Beconi-Barker M G, Hornish R E, et al. Ceftiofur hy drochloride: plasma and tissue distribution in swine following in tramuscular administration at various doses [J]. Veterinary Pharmacology & therapeutics, 1996, 19(3), 192-199。随着畜禽粪便作为廉价肥料用于农田土壤，进而给土壤环境造成严重的污染，如在我国，土壤中可检测到的土霉素含量高达200mg/kg，参见：王冉、刘铁铮、 王恬. 抗生素在环境中的转归及其生态毒性[J]. 生态学报, 2006,26(1):265-269。 

近年来，由于土壤中土霉素的污染给土壤生态安全造成了不良的影响，因此对于生长在土霉素污染土壤中的生物对其吸收累积现象得到了广泛的研究和关注。其中，生物体中土霉素的提取是准确测定土霉素残留量的关键技术，直接决定了最终测定土霉素含量的准确性。由于生物种类存在差异性，因此同一浸提剂并不一定适合对所有生物种类中土霉素的提取。因此有必要对于不同的生物种类选择最优浸提剂进行提取，并建立简单、准确有效的浸提方法。GB/T 5009.95-2003中，利用Na₂EDTA-McIlvaine缓冲液对蜂蜜中的土霉素等四环素类抗生素进行提取测定。Boonsaner 和Hawker，参见：Boonsaner M, Hawker D W. Accumulation of oxytetracycline and norfloxacin from saline soil by soybeans. Science of the Total Environment. 2010, 408: 1731-1737，利用Na₂EDTA-McIlvaine缓冲液提取大豆体内的土霉素，但并未对缓冲液的提取浓度进行解释和说明。Blackawell等，参见：Blackwell P A, Lutzhoft H C H, Ma H P et al. Fast and robust simultaneous determination of three veterinary antibiotics in groundwater and surface water using a tandem solid-phase extraction with high-performance liquid chromatography-UV detection[J]. Journal of Chromatography A, 2004, 1045(1-2), 111-117，研究发现：在超声辅助萃取下，用Na₂EDTA-McIlvaine缓冲液-甲醇作为浸提剂提取土壤中的土霉素，加标回收率可高达27-75%。Juhel-Gauguin等研究发现，参见：Juhel-Gaugain M., McEvoy J. D. G., VanGinkel L. A. Measurements for certification of chlortetracycline reference materials within the European Union Standards, Measuraments and Testing programme[J] Analytical Chemistry, 2000, 368(7), 656-663，用EDTA缓冲液-甲醇作为浸提剂对动物组织中的土霉素具有较好的提取效果，加标回收率可达到75%以上。胡献刚等报道，参见：胡献刚、罗义、周启星、徐琳. 2008. 固相萃取-高效液相色谱法测定畜牧粪便中13种抗生素药物残留. 分析化学，36（9）：1162-1166，柠檬酸缓冲液酸化的乙腈提取猪粪中土霉素等四环素类抗生素效果比较好。Anne，参见：Anne Marie Jacobsen, Bent Halling-S?rensen, Flemming Ingerslev, Steen Honoré Hansen. Simultaneous extraction of tetracycline, macrolide and sulfonamide antibiotics from agricultural soils using pressurised liquid extraction, followed by solid-phase extraction and liquid chromatography–tandem mass spectrometry. Journal of Chromatography A, 2004, 1038: 157-170，提出利用甲醇-草酸（体积比1:1）能够对土壤中的土霉素进行很好的浸提。目前，已经建立了完善的对畜禽肉类中土霉素的提取方法，采用的是国标（GB/T 5009.116-2003）中提出的5%高氯酸浸提法。由于生物种类的差异性，对于土壤、粪便、蜂蜜、蔬菜、畜禽肉类中土霉素进行提取的浸提剂并不一定适合于土壤生物蚯蚓中土霉素的提取，然而到目前为止还未见到关于利用何种浸提剂来提取蚯蚓中土霉素比较合适的研究报道。