[发明专利]一种检测室内空气急性暴露免疫毒性方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种室内污染空气毒性的评价方法，具体涉及到一种利用淋巴细胞亚群检测试验使室内空气免疫毒性可以定量检测的方法。

背景技术

为了保障室内空气的安全，降低室内装潢、装饰所带来的威胁，人民常用各种方法对室内空气进行评价，以有效的方法掌握室内空气引起的健康风险。

常用检测免疫毒性的方法有，免疫病理学检查、超敏反应检测、细胞因子检测、和免疫功能检测，免疫器官的淋巴细胞亚群检测是一种免疫功能检测，用流式细胞仪检测淋巴细胞亚群是近些年来检测免疫毒性的新技术，具有敏感、简便、所需样品少等优点。得到了广泛的应用，相对于病理学、超敏反应和细胞因子检测具有一定的优势，虽然淋巴细胞亚群检测早已作为规范性方法，但用流式细胞仪检测淋巴细胞亚群的试验方法和结果分析仍需进一步的标准化，且毒性反应不够直观，因此寻找一种直观、明确、结果易于统一的方法对室内空气毒性进行检测是室内空气毒性物质的定量化评价发展的要求。

发明内容

本发明针对现有室内空气免疫毒性检测方法的不足，提供了一种淋巴细胞亚群试验检测空气免疫毒性的方法，该方法将VOCs作为标准毒性物质，在评价室内空气在免疫毒性时以VOCs浓度表示室内空气的免疫毒性，实现了室内空气毒性评价的定量化，而且检测结果更加直观、明确、易于统一，为室内空气进行定量化评价提供有力的支持。

本发明选则复合VOCs作为标准毒性物质，甲醛、苯是世界卫生组织致癌物质名单中的两种，甲苯、二甲苯在室内空气中也较为常见，也能够增加致癌性，现行室内空气标准分别为：0.10mg/m3、0.11mg/m3、0.20mg/m3、0.20mg/m3。因此用复合VOCs浓度表示室内空气毒性结果易于统一。其操作为：用小鼠在不同浓度下的复合VOCs进行染毒，以复合VOCs浓度为横坐标，以CD4+/CD8+为纵坐标绘制标准曲线，然后用小鼠在待测空气中染毒，得出小鼠脾的CD4+/CD8+，带入到标准曲线。就得到了VOCs浓度表示的室内空气毒性。这种方法避免了其他试验因素所产生的影响，是室内空气毒性更加准确，检测结果更易于统一。

为了解决上述技术问题，本发明采用如下步骤

一种单细胞凝胶电泳试验检测室内空气免疫毒性的方法，其特征至少包括以下步骤：

（a）将小鼠放入到合适浓度的VOCs中进行连续10天的染毒处理，每天2小时；

（b）脾单细胞悬液的制备：小鼠脾脏用注射器芯轻轻研磨或用小剪刀轻轻剪碎，加入到含2mL2%的小牛血清的PBS中，然后过200目滤网，剩余液体在1,200rpm下离心10min。经0.17moL/L的NH4Cl红细胞裂解液裂解红细胞10min，1,200rpm离心5min，弃上清，用2mL PBS洗涤两遍，弃上清，然后用台盼蓝染色确定脾细胞的活性超过90%，最后用2%热灭活FCS的PBS调节细胞数为2-10×106/mL/管；

（c）染色：在上述单细胞悬液管中加入荧光抗体anti-CD3-FITC、anti-CD4-PE或者anti-CD8-PERCP、anti-CD4-PE室温避光孵育30min；

（d）重悬：用PBS重悬细胞，避光保存；

（e）上机检测：建立CD3/CD4、CD8/B220散点图并设置为显示G3=R1*R2门内的细胞，获取细胞总数10000个，根据同型对照设十字门分析TH(CD3+CD4+)和Ts(B220+CD8+)细胞的表达情况；

（f）计算CD4+/CD8+，以VOCs浓度为横坐标，以CD4+/CD8+为纵坐标，绘制CD4+/CD8+对VOCs浓度的标准曲线；

（g）将小鼠放入到待测室内空气进行连续10天的染毒处理，每天2小时；

（h）然后按照b-e步骤对小鼠脾进行淋巴细胞亚群的检测，并计算出CD4+/CD8+；

（i）用待测室内空气的CD4+/CD8+带入到上述标准曲线，即可得到以VOCs浓度表示待测室内空气毒性；

所述的待测室内空气毒性小于室内空气质量标准100倍的VOCs的毒性。

本发明选择复合VOCs为表准毒性物质，通过复合VOCs对CD4+/CD8+的曲线实现了室内空气毒性的定量化评价，本发明的方法更加直观，准确的检测室内空气的免疫毒性，结果易于统一，重现性较好，能够对室内空气污染状况作出判断，为室内空气污染和设备的研发提供支持，降低由于室内空气污染而导致的人类的致癌风险。

附图说明

附图为脾细胞的CD4+T/CD8+T与室内空气污染水平之间的关系图。