[发明专利]鹿产品中激素和肌苷的分析测试方法

说明书

技术领域

本发明属于来源于动物的药物中有效成分的分析方法的技术范围。具体涉及鹿体材料中有效成分分析方法。

背景技术

鹿全身都是宝，鹿茸、鹿胎、鹿血、鹿角等均为名贵药材，在我国药用历史悠久。“鹿茸”、“鹿角”、“全鹿”等的功能与主治病证首载于《神农本草经》，此后，中国历代本草皆对鹿的不同药用部位进行了大量收载。《本草新编》中记载的“鹿胎”等，在《本草纲目》中记载鹿药用部位有“鹿茸”、“鹿角”、“鹿骨”、“鹿肉”等的性味、功能与主治病症，鹿不同部位的中药材至今仍广泛应用于临床中。激素是生物体内具有高度生物活性的一类物质，在生物体内即使微量(如ng级水平)也可起到生物活性作用。肌苷是机体内ATP、辅酶A、核糖核酸及脱氧核糖核酸的组成部分，参与机体的物质代谢和能量代谢。它能提高机体ATP的水平，可转化为多种核苷酸，并参与蛋白质的合成。适用于各种原因引起的白细胞减少症、血小板减少症、各种心脏疾患、急性及慢性肝炎、肝硬化等，此外尚可治疗中心视网膜炎、视神经萎缩等。因此对鹿中药材性激素和肌苷含量进行分析，对控制鹿药材的质量及揭示其疗效作用的物质基础具有重要的意义。

目前对中药材真伪的鉴别还主要停留在仅凭感官和经验来判断的水平，具有很严重的不准确性和不科学性，中药材成分的检测也还是处于积累和开发阶段。

动物性激素目前主要采用试剂盒法进行检测，测一种激素需使用一种试剂盒，操作起来比较繁琐。现公开发表的液相色谱方法，仅能测一、两种激素，同时存在着多种激素未被分开，而被误认为一种激素，从而使测定结果有严重不准的可能。

发明内容

本发明的目的在于提供一种激素和肌苷的快速、准确的高效液相色谱分析方法，所述的激素为雌二醇、雌三醇、皮质醇、孕酮、雌酮、前列腺素E₁和前列腺素E₂中的一种。

本发明采用高效液相色谱同时测定鹿中药材中的7种激素和肌苷含量的方法，色谱条件是ODS C8色谱柱，以乙腈和水为流动相，乙腈和水体积比为80:20，流速为0.6～1.2ml/min，柱温30℃，进样量25μl，用二级管阵列检测器，检测波长：雌二醇212nm，雌三醇204nm，皮质醇242nm，雌酮281nm，孕酮254nm，前列腺素E₁212nm、E₂242nm，肌苷244nm。将处理好的标准对照品和试样溶液进行液相色谱分析，以对应的峰面积，用标准工作曲线计算相应的激素含量。

本发明的一方面在于，公开一种鹿产品中激素和肌苷的分析测试方法，其包括以下操作步骤，

A.标准对照品溶液的制备：

分别称取雌二醇、雌三醇、皮质醇、孕酮、雌酮、前列腺素E₁和前列腺素E₂、肌苷的标准对照品作为溶质，混合后加入溶剂甲醇使其溶解；制得的混合液为混合标准贮备液；所述混合标准贮备液中各溶质浓度均为1mg/mL；分别移出一定量的混合标准贮备液用乙腈和甲醇稀释，分别制得各溶质浓度均为1mg/L、2mg/L、3mg/L、4mg/L、5mg/L的混合标准对照品溶液，且每个浓度的混合标准对照品溶液中均含有体积比为10%的甲醇；

B.鹿产品试样溶液的制备：

按照0.3～1.0g鹿产品用10ml甲醇定容的比例将样品混合均匀，再用超声波破碎仪破碎3min，在4000r/min下离心20min，从上清液中取出1mL用乙腈定容至10mL，进行色谱分析；

C.色谱分析：

将步骤A制备的标准对照品溶液和步骤B制备的鹿产品试样溶液分别进行液相色谱分析，以对应的峰面积，用标准工作曲线计算相应的样品含量，液相色谱分析的条件如下：

采用ODS C8色谱柱，流动相为乙腈和水体积比为4:1，流速为0.6～1.2ml/min，柱温30℃，进样量25μl；

用二级管阵列检测器分别检测波长，其中雌二醇212nm，雌三醇204nm，皮质醇242nm，雌酮281nm，孕酮254nm，前列腺素E₁212nm、E₂242nm，肌苷244nm。

对于上述技术方案中，优选的情况下，所述步骤B中所述的鹿产品为鹿茸、鹿胎、鹿角帽和鹿血中的一种；所述鹿血为公鹿或母鹿的鲜血。

对于上述技术方案中，优选的情况下，所述步骤B中所述的鹿产品为鹿血时，按照1.0g鹿血用10ml甲醇定容的比例将样品混合均匀；鹿产品为鹿茸、鹿胎或鹿角帽时，按照0.3g鹿茸、鹿胎或鹿角帽用10ml甲醇定容的比例将样品混合均匀。