[发明专利]一株产纤维素酶菌株H1及其产酶培养基

说明书

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一株产纤维素酶菌株H1及其产酶培养基。 

背景技术

纤维素材料是自然界中最丰富的可再生资源，利用现在生物技术将纤维素材料转化为乙醇等液体燃料，不仅可以作为新资源新能源为人类造福，缓解或解决化石能源对环境污染的问题，同时也可以实现对农业剩余资源的高效利用，现已受到世界各国的普遍重视。采用微生物技术处理秸秆是当前研究最多的一种秸秆处理方法，纤维素酶能将天然纤维素降解，生成纤维素分子链、纤维素二糖和葡萄糖，然而目前主要制约纤维素材料转化为乙醇产业化的关键因素之一是纤维素酶效率低下，造成生产成本过高。因此，筛选具有高活性纤维素酶的秸秆降解微生物菌株以及相关研究是当前研究的热点和难点。目前研究较多的是霉菌，其中木霉、曲霉、根霉和青霉均具有较强的酶活力，尤以绿色木霉、里氏木霉和康氏木霉为典型。而对于细菌的研究很少有报道。有细菌所产生的纤维素酶一般最适pH为中性至偏碱性，近20年来，随着中性纤维素酶和碱性纤维素酶在棉纺织品水洗整理工艺及洗涤剂工业中的成功应用，细菌纤维素酶制剂已显示出良好的应用前景。 

发明内容

本发明的目的是提供一株产纤维素酶菌株H1及其产酶培养基，对研究产纤维素酶作用机理及纤维素酶制剂的生产具有潜在理论和应用价值。 

本发明的芽孢杆菌(Bacillus sp.)H1，已于2013年4月1日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其简称CGMCC，保藏单位地址 ：北京市朝阳区北辰西路 1 号院 3 号，菌株保藏编号为：CGMCC No.7395。 

     本发明对对菌株H1的产酶能力进行初步优化，得到其最佳产酶培养基为每30ml中含麸皮0.2g、麦秆0.2g，氯化铵0.3g、蛋白胨0.1g，初始pH 8.5。 

附图说明

图1为酶活鉴定板上菌株的水解圈情况 

图2为用草酸铵结晶紫染料于载玻片上对其进行简单染色，并在油镜下观察其形态特征

图3为16s rDNA扩增结果电泳图

图4为H1 16s rDNA系统进化树

图5 为因素指标趋势图

具体实施方式

本发明用下列具体实施例来进一步说明本发明。 

实施例：1材料与方法 

1.1    材料

主要试剂：

羧甲基纤维素钠、硝基水杨酸试剂(称取酒石酸钾钠91g，溶于500mL蒸馏水中，加热至50℃，再依次加入3,5-二硝基水杨酸(DNS)3.5g,NaOH 20g,苯酚2.5g，无水亚硫酸钠2.5g，搅拌完全溶解。冷却后用蒸馏水定容至1L。储于棕色瓶中4℃保存，放置一周后使用，使用前过滤)、pH4.6醋酸缓冲液：所述醋酸缓冲液由冰醋酸与醋酸钠配置、刚果红、无水葡糖糖，PCRmix酶(购自北京天根公司)，胶回收试剂盒(购自大连TaKaRa公司)，化学试剂均为分析纯；

培养基：(灭菌条件均为120℃ 20min)

富集培养基，1L中含：CMC-Na 10g 黄豆饼粉 5g (NH₄)₂SO₄ 2.5g pH 8.5

初筛培养基，1L中含：CMC-Na 10g 黄豆饼粉 5g (NH₄)₂SO₄ 2.5g pH 8.5 琼脂 15g

斜面保藏培养基，1L中含：麸皮 70g 黄豆饼粉 30g (NH₄)₂SO₄ 2.5g pH 6.0 琼脂20g

液体发酵培养基，1L中含：CMC-Na 10g 麸皮 10g (NH₄)₂SO₄ 3g MgSO₄ 酵母膏 0.5g CaCl₂ 0.4g KH₂PO₄ 1g 蛋白胨 2g pH 8.5

1.2 方法

(1) 样品采集：采集附近草丛中的土壤样品，用于分离选育纤维素降解菌。