[发明专利]一种同时快速筛查鉴定水样中生物碱的高效液相色谱-飞行时间质谱联用方法

说明书

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体地说，涉及一种同时快速筛查鉴定污水处理厂废水中生物碱类化合物的方法，更具体地说，涉及一种同时快速筛查鉴定水样中生物碱的高效液相色谱-飞行时间质谱联用方法。 

背景技术

随着药物越来越多的使用，加上医学进步而导致的其种类的复杂和多样化，这些含有药物等化合物的日常生活污水经由人体使用代谢后排放进入环境介质中的概率大大提高。而这些药物中的活性化合物对于环境的潜在风险尚不明确，需要进一步的探索和研究。 

生物碱是研究得最早的一类有生物活性的天然有机化合物，是存在于大自然动植物及蕈类中的胺类分子。生物碱大多具有生物活性，往往是很多药用植物，包括许多中草药的有效成分。例如，目前研究得最多的生物碱，如从鸦片中分得的吗啡具有强烈的镇痛作用；具有止咳作用的罂粟碱具有松弛平滑肌作用；麻黄中的麻黄碱具有平喘作用；黄连、黄柏中的小檗碱具有抗菌作用；曼陀罗、天仙子、颠茄中的莨菪碱具有解痉和解有机磷中毒的作用等等。据统计目前临床应用的生物碱有80多种。生物碱大多具有复杂的化学结构，能与酸结合成盐而溶于水，容易被体内吸收。目前已报道并搞清楚化学结构的生物碱已达4000多种，并以每年约上百个的速度递增。 

查阅国内外的文献资料，目前对于环境水体中的有机污染物的检测绝大部分仍是利用高效液相色谱—质谱（LC-MS/MS）联用的手段进行定量测量，但是鉴于污染物的复杂性以及非目标性污染物（non-targeted compound）筛选的必要性，可以对样品进行全面扫描并定性的高效液相色谱-飞行时间质谱（LC-TOF-MS）则具有明显优势。 

目前利用LC-TOF-MS仪器进行的研究集中于生物体内的代谢化合物和代谢组研究，而对药物，特别是生物碱类化合物的筛查鉴定，国内外鲜有报道。 

中国专利号为200910067479.X，公开日2010年02月10日，公开了一份名称为基质辅助激光解析电离质谱直接检测中药材中生物碱的方法的专利文件，该发明提供了基质辅助激光解析电离质谱直接检测中药材中生物碱的方法，直接检测的中药材为含有乌头碱类、小檗碱类、马钱子碱类生物碱的中药材，中药材包括含有乌头碱类生物碱的川乌，草乌，附子中药材；含有小檗碱类生物碱的黄连，黄柏中药材；含有马钱子生物碱类的马钱子中药材。该 发明提供的方法省去了生物碱提取分离的过程，既节省了生物碱成分提取的时间，同时也避免了在提取过程中高温、溶剂萃取对生物碱成分造成的影响。但是该方法是检测已知的物质，而且检测方法复杂，而环境中具有的生物碱的种类比较多，成分复杂，含有哪一种生物碱都是未知的，所以该发明不适合环境介质中的生物碱的浓度检测。 

发明内容

1.要解决的问题 

现有技术无法针对环境介质中的生物碱的成分和浓度检测的问题，本发明提供一种同时快速筛查鉴定水样中生物碱的高效液相色谱-飞行时间质谱联用方法，其能够在单独的一次分析测定中对水样中的未知化合物的一级和二级质谱分别进行快速连续的扫描和筛查方法，并且通过不同物质的一级和二级质谱谱图的提取分析并与现有的物质库进行比对，再通过软件给出的打分值判定某种物质的存在概率，定性评价综合全面，可以实现传统仪器不能达到的全面筛选非目标性的生物碱污染物这一功能。 

2.技术方案 

为了解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下： 

一种同时快速筛查鉴定水样中生物碱的高效液相色谱-飞行时间质谱联用方法，其步骤为： 

（A）滤膜过滤：水样经过玻璃真空过滤器分别通过两层滤膜； 

（B）固相小柱萃取：利用固相萃取小柱对水样中所含的生物碱类药物进行富集； 

（C）溶剂洗脱：利用有机溶剂将目标物从固相萃取柱上洗脱下来； 

（D）浓缩与定容：对洗脱液进行浓缩，溶剂替换、定容，过膜后保存； 

（E）上机检测：通过高效液相色谱-飞行时间谱联用仪对样品进行筛查和鉴定，采用Waters BEH C18液相色谱柱作为分离柱进行分析，采用加入了甲酸的甲醇和加入了甲酸的水作为流动相进行梯度洗脱；检测时以ESI为离子源，电离模式为正离子模式以及选择IDA为质谱扫描和数据采集方式；最后的筛查和鉴定是利用仪器自带的compound数据库进行排查和筛选，检查是否含有生物碱相的存在。 

进一步地，所述的步骤（A）中所用两层滤膜分别是1um的玻璃纤维滤膜和0.45um的尼龙滤膜。