[发明专利]一种手性分离多种基本氨基酸的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种利用反相高效液相色谱和手性固定相来手性分离一些基本氨基酸的方法，利用手性固定相在高效液相色谱系统上手性分离一些基本氨基酸对映异构体， DL-亮氨酸、DL-谷氨酰胺、DL-苯丙氨酸、DL-色氨酸、DL-酪氨酸。

背景技术

目前，自然界中已发现180多种氨基酸，其中参与蛋白质合成的氨基酸只有20多种，称为基本氨基酸。由于许多药物对映体之间在药理、毒理和临床疗效等方面存在较大差异，因此建立快速而灵敏的分离和测定对映体化合物的方法十分重要。而且药物治疗多肽有副作用低，药效高，针对性强，不会蓄积于体内而引起中毒的优点，越来越多的多肽药物应用到了癌症，肝炎，糖尿病临床治疗中，目前国内的药物治疗多肽发展迅速，药物多肽合成方法中无论是液相合成，固相合成，片段连接都会使用到氨基酸作为原料，对于多肽合成来说，防止消旋化是一个十分重要的问题。为了保证合成产物的光学纯度，除了在合成过程中严格控制消旋化的发生以外，还必须严格采用光学纯的原料氨基酸。因此，氨基酸对映体的检测对于光学活性多肽的合成至关重要。而一种快速，简单，经济，应用范围广的手性分离方法对工作效率的提高也是至关重要的。

很多时候，分离氨基酸对映体需要进行衍生化，这种方法比较复杂而且需要花费一定的额外成本，需要用到多种手性流动相来进行测试，增加了测试时间，因此，找到一种快速有效的氨基酸分离方法是很有必要的。

发明内容

本发明的目的是提供一种利用高效液相色谱法，同时使用替考拉宁键合手性固定相进行多种基本氨基酸的手性分离方法。此方法可以解决高效液相色谱法手性分离体系中使用的流动相体系比较繁琐和手性色谱柱不稳定的技术问题。

本发明的技术方案如下：一种手性分离多种基本氨基酸的方法，采用替考拉宁手性固定相的高效液相色谱方法，包括以下步骤 ：

将DL-亮氨酸、DL-谷氨酰胺、DL-苯丙氨酸、DL-色氨酸、DL-酪氨酸等外消旋样品配制成1-20mg/ml浓度，用甲醇和水进行溶解过滤作为待测样品；

手性色谱柱：ChiroBiotic T（替考拉宁键合手性柱），5μm，4.6×250mm(I.D)；

流动相   A： 甲醇    B：水；

流速：  0.3-0.6ml/min(优选0.4ml/min)；

流动相的洗脱条件如下：

               时间(min)         A （体积百分比）B（体积百分比）

                0.01             40%           60%

                30.0             40%           60%

检测波长：210nm-220nm；

以甲醇比水体积比4:6的比例平衡手性色谱柱，平衡40分钟，待紫外检测器的基线维持在零点左右时可以准备分析样品。

将配制好的样品注射进入高效液相色谱系统，在手性固定相分离后，通过色谱工作站记录分离色谱图，查看相关数据，检验两个色谱峰是否完全分离。

按照本发明，所述的手性分离多种基本氨基酸的方法，手性色谱柱使用的是以硅胶为基质的，在硅胶基质上化学键合大环抗生素-替考拉宁的手性色谱柱（Tei-CSP）。

本发明所用的样品溶解条件为体积比，甲醇：水=4:6；

本发明所述的样品在4.6mm内径的分析柱上的样品浓度分别为：

DL-亮氨酸 20mg/ml、DL-谷氨酰胺 20mg/ml、DL-苯丙氨酸 3mg/ml、DL-色氨酸 1mg/ml、DL-酪氨酸 1mg/ml。

本发明的有益效果 ：简化了基本氨基酸的手性分离问题，提高了测试效率，本发明所述的手性分离方法， 只使用简单流动相，分离速度快，并且分离的条件对于温度也没有特殊要求，分离过程中不需要柱温箱，不增加仪器成本，同时替考拉宁键合的手性柱稳定性比较好，在手性分离上千次样品后仍能得到很好的手性分离效果，同时这种手性柱也能用于其它类的氨基酸，肽，和手性药物的手性分离，使用范围广，有很好的经济价值。

附图说明

图1：DL-亮氨酸消旋体的手性分离色谱图。

图2：DL-谷氨酰胺消旋体的手性分离色谱图。

图3：DL-苯丙氨酸消旋体的手性分离色谱图。

图4：DL-色氨酸消旋体的手性分离色谱图。

图5：DL-酪氨酸消旋体的手性分离色谱图。