[发明专利]一种新型研究酶反应动力学的pH荧光探针

说明书

技术领域

本发明提出的是设计研发以CdTe量子点作为pH荧光探针，用于监测猪胰脂肪酶（PPL）催化丁酸缩水甘油酯的水解反应。

背景技术

脂肪酶一般来自微生物，其次来自哺乳动物和植物，脂肪酶可以用来催化酯水解反应和酯交换反应。通常酶催化酯水解反应选用PNP作为探针，通过溶液的吸收值变化而判断水解进程；而CdTe量子点是采用荧光强度和H⁺的线性关系进行分析。两种分析方法对比分析，我们发现纳米晶体抗干扰能力更强。而且吸收值的测定总是以水作为参照物，如果吸收值超过1时，其结果变得不可信，而生物样品的复杂性往往会出现这种问题，而荧光光谱却不存在这个问题，分析结果相对来说比较灵敏。从两种分析物质来说同样浓度的探针浓度，在相同的时间内，PNP衰减的速度非常快，一般不能超过10分钟，而纳米晶体却可以稳定超过15分钟，说明纳米晶体具有更大的监测范围。

基于此，我们发明了一种用于检测酶反应动力学的pH荧光探针，用于监测猪胰脂肪酶（PPL）催化丁酸缩水甘油酯的水解，这种探针相对于传统的硝基苯酚（PNP）探针具有灵敏度高、方便快捷、操作简单、稳定可靠等优点。

发明内容

本发明提出研发以CdTe量子点作为pH荧光探针，用于监测猪胰脂肪酶（PPL）催化丁酸缩水甘油酯的水解反应，具体方法分为以下五个步骤：

1. 天然PPL的预处理；

2. 酶溶液（10mg/mL）的配制；

3. 反应用的酯溶液（14mmol/L）的配制；

4. 利用CdTe量子点作为pH荧光探针标准曲线的绘制；

5. 利用CdTe量子点作为pH荧光探针指示酶催化酯水解反应。

附图说明

图1为本发明流程示意图。

具体实施方式

天然PPL的预处理：将天然的PPL溶于PBS溶液（pH=7.0，50mmol）中，在4℃条件下搅拌2小时，然后将溶液离心处理（8000rpm，5min），得到的上清液经冻干处理后，待用。

酶溶液（10mg/mL）的配制：把冻干处理后PPL溶于PBS溶液中（pH=8.0，100mmol），得到反应用的酶溶液（10mg/mL）。

反应用的酯溶液（14mmol/L）的配制：反应用的酯溶液（14mmol/L）是将丁酸缩水甘油酯（20μL）溶解于乙腈中。

利用CdTe量子点作为pH荧光探针标准曲线的绘制：测定一系列、不同pH的CdTe溶液所对应的荧光强度，建立标准曲线数据库。

利用CdTe量子点作为pH荧光探针指示酶催化酯水解反应：取酯溶液（100μL）、纳米晶体溶液（2.5mL）、PBS（300μL，pH=7.0，50mmol）混匀后放入石英比色皿中，一分钟后加入酶溶液100μL，迅速将比色皿放入荧光分析仪中，每隔一分钟检测一次，并记录结果，分析得出结论。