[发明专利]一种基于流式细胞术的精子顶体反应检测试剂

说明书

技术领域

本发明涉及精子顶体反应检测试剂，具体涉及一种基于流式细胞术的精子顶体反应检测试剂。

背景技术

精液分析是不育症检查中不可缺少的一项，主要包括精子浓度、活力和形态学检查等，然而这些检查指标不能全面评估男性生育力；且有部分男性不育患者的精液常规检查未见正常，因此，需要引入新的精子功能检测与评价指标。顶体是精子所特有的结构，在识别、结合卵子透明带的过程中，顶体被诱导发生顶体反应，从而实现精子DNA与卵子DNA融合。因此可通过检测精子发生顶体反应的能力来评估精子受精能力。

目前检测精子顶体反应的方法主要是借助电镜、显微镜（荧光显微镜）等方法，如公告号为CN101865844的发明专利，就公开了包括保存液、荧光结合物和荧光封固液作为检测试剂，检测时先用精子培养液（如NaOH、HTF、BWW、M16等）孵育精子获能，再用Ca²⁺载体作为顶体反应诱导液诱导，通过荧光结合物（染色液）和荧光封固液在荧光显微镜记录顶体反应的精子数量。但此类方法检测结果过于依赖人为操作，检测结果主观性强；操作过程繁琐，检测效率低下，重复性差；部分染色液的配方对精子的损伤较大，影响检测结果的稳定性；有些方法对精液标本要求过高，不适用于常规检测，难以在临床上推广应用。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种精子获能效果好、便于诱导的基于流式细胞术的精子顶体反应检测试剂。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种基于流式细胞术的精子顶体反应检测试剂，包括顶体反应诱导液和染色液，还包括精子获能液，所述精子获能液的pH 值7.0～7.8，含有浓度为0.05～0.19mol/L的氯化钠、浓度为0.5～2.0 mmol/L的磷酸二氢钾、浓度为2.0～10.5 mmol/L的葡萄糖、浓度为2.3～7.8 mmol/L的氯化钾、浓度为0.2～2.4 mmol/L的七水硫酸镁、浓度为0.8～3.4 mmol/L的二水氯化钙、浓度为0.01～0.04 mol/L的N-2-羟乙基哌嗪-N-2-乙磺酸二钠盐（Hepes-Na）、浓度为2.4～5.6 mmol/L的碳酸氢钠、浓度为0.1～0.5 mmol/L的丙酮酸钠、质量百分浓度为2～10%的牛血清白蛋白（BSA）、体积百分浓度为0.15～0.75%的乳酸钠溶液，所述乳酸钠溶液的浓度为600g/L。

所述染色液分为FITC-PSA荧光染色液和碘化丙啶染色液，所述碘化丙啶染色液的pH值7.0～7.8，含有浓度为50～190mmol/L的氯化钠、浓度为2.3～7.8 mmol/L的氯化钾、浓度为3.2～10mmol/L的磷酸氢二钠、浓度为0.5～2.0mmol/L的磷酸二氢钾、浓度为100～1000μg/mL的碘化丙啶（PI）。FITC-PSA荧光染色液的pH值也为7.0～7.8，含有浓度为50～190mmol/L的氯化钠、浓度为2.3～7.8 mmol/L的氯化钾、浓度为3.2～10mmol/L的磷酸氢二钠、浓度为0.5～2.0mmol/L的磷酸二氢钾、浓度为0.2～1mg/mL的异硫氰酸荧光素标记的豌豆凝集素（FITC-PSA）。

与现有技术相比，本发明优点在于本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种基于流式细胞术的精子顶体反应检测试剂，包括顶体反应诱导液和染色液，还包括精子获能液，精子获能液的pH 值7.0～7.8，含有氯化钠、磷酸二氢钾、葡萄糖、氯化钾、七水硫酸镁、二水氯化钙、N-2-羟乙基哌嗪-N-2-乙磺酸二钠盐、碳酸氢钠、丙酮酸钠、牛血清白蛋白、乳酸钠溶液，这样用精子获能液代替目前的精子培养液，获能效果好，便于诱导，可以用流式细胞术检测精子顶体反应，使精子顶体反应检测结果准确、稳定可靠、重复性好、临床易于推广。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明作进一步详细描述。