[发明专利]用于长期造血种群恢复的方法和组合物

说明书

本申请是国际申请日为2009年11月16日、国际申请号为PCT/US2009/064614、进入国家阶段的申请号为200980154497.X、发明名称为“用于长期造血种群恢复的方法和组合物”的PCT申请的分案申请。 

与相关申请的交叉引用 

现在公开的主题要求2008年11月14日提交的美国临时专利申请系列号61/199,356的优先权权益；其公开内容在此通过引用全文并入本文。

资助声明 

该成果得到了美利坚合众国国立卫生研究所资助R01 CA106281-01和R01 DK074720的支持；因此，美国政府对本文公开的主题拥有某些权利。

发明领域

当前公开的主题在一些实施方案中涉及用于在受试者中种群恢复细胞类型的方法。在一些实施方案中，当前公开的主题涉及给有需要的受试者以一定的量及通过一定的途径施与包含多个分离的脐带血衍生的CD133⁺/GlyA^-/CD45^- 干细胞的组合物，所述量和途径足以允许用于在受试者中种群恢复细胞类型的脐带血衍生的至少一部分移入受试者的靶部位并在其中分化，由此在受试者中种群恢复细胞类型。 

背景 

血液移植术的发展增加了对分离自组织可相容供体的造血干细胞(HSC)的需求。公知合适的骨髓(BM)供体通常是短缺的。不幸的是，脐带血(CB)含有的HSC绝对数量比BM低得多，使得CB在成人患者的治疗用途中不那么优选。此外，当前极难以可靠地扩增分离自BM和CB-HSC的长期种群恢复(LT)的HSC，使得加重了对新的LT-HSC供应的需求。

因此，假设胚胎干细胞衍生的HSC可能比分离自诸如BM和CB的常规来源的HSC具有许多优势。然而，这已被证明难以应用，因为难以应用和优化使胚胎干细胞(ESC)沿着造血谱系分化的策略。此外，人类ESC是各种限制的对象，这限制了它们的可利用性和有用性，即使对于实验研究也如此。 

发明概述 

本概述列出了当前公开的主题的数个实施方案，以及在许多情况下列出了这些实施方案的变形和互换。这一概述仅是许多且不同的实施方案的示例。给定实施方案的一个或更多个代表性特征的提及同样是示例性的。此类实施方案可在有或无该提及的特征的情况下一般地存在；同样地，这些特征可应用于当前公开的主题的其他实施方案，而无论在这一概述中列出与否。为避免过多的重复，这一概述没有列出或提示此类特征的所有可能组合。

当前公开的主题提供了分离脐带血细胞的CD133⁺/CD45^-/GlyA^- 亚群的方法。在一些实施方案中，该方法包括(a)提供脐带血细胞的初始群；(b)使该初始细胞群与对CD133特异的第一抗体、对CD45特异的第二抗体以及对血型糖蛋白A(GlyA)特异的第三抗体，在足以允许每一抗体与初始细胞群每一细胞上的其靶标(如果存在的话)结合的条件下接触；以及(c)分离CD133⁺、CD45^-且GlyA^-的细胞亚群。在一些实施方案中，该接触步骤包括使脐带血细胞与特异性结合CD133、GlyA和CD45的多个抗体同时地或反复地接触。在一些实施方案中，该方法还包括从CD133⁺/GlyA^-/CD45^-细胞中分离ALDH^高细胞，从CD133⁺/GlyA^-/CD45^-细胞中分离ALDH^低细胞，或分别从CD133⁺/GlyA^-/CD45^-细胞中分离ALDH^高细胞和ALDH^低细胞。 

当前公开的主题还提供了包含基本上纯化的分离自脐带血(CB)的CD133⁺/GlyA^-/CD45^-细胞的分离的干细胞群。在一些实施方案中，该CD133⁺/GlyA^-/CD45^-细胞是ALDH^高细胞。在一些实施方案中，该CD133⁺/GlyA^-/CD45^-细胞是ALDH^低细胞。