[发明专利]一种荧光标记半滑舌鳎的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种水生动物放流标记技术，尤其涉及一种荧光标记半滑舌鳎的方法。

背景技术

半滑舌鳎为中国近海底层的重要经济鱼种之一，由于过度捕捞，资源大量减少。目前半滑舌鳎的全人工繁育技术已经突破，为了恢复其渔业资源，沿海地区陆续开展了人工苗种增殖放流。为更好的掌握半滑舌鳎放流后的资源状况，利用标记—重捕技术对其进行跟踪调查。

标记—重捕技术是鱼类行为、生物、生态学基础研究中的应用技术之一。它是指将天然水域中捕获或人工繁育的鱼做上标记后放回自然水域，重新捕获时可根据相关的记录和生物学数据，研究其游动线路、移动速度、分布范围以及生长该鱼种的年龄、生长情况、摄食特点等生物学特性。

目前国内外的鱼类标记技术主要分为两大类：体外标记法和体内外标记法。体外标记法包括挂牌标记、切鳍标记、烙印标记，体内标记法包括分子标记、金属线码标记、档案室标记、生物遥测标记、分离式卫星标记法等。

舌鳎体型舌鳎体侧扁，喜欢贴地游泳前行。上述挂牌标记，不但对鱼体伤害较大，游泳时其鱼体上的标记牌也会增加水阻力，影响其正常活动；切鳍标记、烙印标记等方法对鱼体伤害也较大，同时标记的保持率较低；分子标记法、金属线码标记、档案室标记、生物遥测标记、分离式卫星标记等需要购置专用标记仪器和读取设备，价格昂贵，且操作繁琐。

发明内容

本发明的目的是提供一种荧光标记半滑舌鳎的方法，旨在提高标记存留率，使标记更加醒目易于辨识，同时降低对标记鱼的伤害，并且该方法操作方法简单，成本低廉。

本发明是这样实现的：一种荧光标记半滑舌鳎的方法，其具有如下步骤：

①麻醉步骤：选取健康，活力良好的半滑舌鳎，先池养1至2天，不喂食；然后，将半滑舌鳎放入浓度为15mg/L～20mg/L的丁香酚溶液中进行浸泡麻醉；麻醉处理时间为1分钟～2分钟；丁香酚溶液中进行浸泡麻醉后，鱼较为安静，便于标记操作，停食能有效提高成活率。

②标记步骤：经麻醉步骤处理后的半滑舌鳎鱼体固定，用注射器将复合荧光试剂注入其表皮形成荧光胶块。环孢霉素A具有抗排异作用，能有效防止排异，具有一定的提高标记成功率的作用。硅胶填料和交联剂能凝固形成支撑结构，便于肉眼观察并且便于取出。本发明技术方案的识别率接近100%。在不借助任何识别工具的情况下，白天肉眼可以看见明显的有色标记，晚上有色标记会发出淡淡的荧光；而在紫外线灯光激发下，肉眼可以看见明显的荧光。采用本配比的维生素K，可以使实验对象具有较高的成活率，并能防止标记附近组织的坏死，提高标记的成功率。本配比的试剂对鱼体的损伤程度较小，标记后不影响半滑舌鳎的正常活动，标记的保留率98%以上本发明操作简单，快速，成本低，能满足批量半滑舌鳎苗种标记的需要，并且标记后的鱼复壮较快。

采取的优化措施包括：复合荧光试剂按重量份数含有30～50份硅胶填料、5～10份交联剂、10至30份有色荧光粉、0.1至1份环孢霉素A。环孢霉素A具有抗排异作用，能有效防止排异，具有一定的提高标记成功率的作用。硅胶填料和交联剂能凝固形成支撑结构，便于肉眼观察并且便于取出。本发明技术方案的识别率接近100%。在不借助任何识别工具的情况下，白天肉眼可以看见明显的有色标记，晚上有色标记会发出淡淡的荧光；而在紫外线灯光激发下，肉眼可以看见明显的荧光。

复合荧光试剂还含有0.01ug/ml～2ug ug/ml的维生素K。采用本配比的维生素K，可以使实验对象具有较高的成活率，并能防止标记附近组织的坏死，提高标记的成功率。本配比的试剂对鱼体的损伤程度较小，标记后不影响半滑舌鳎的正常活动，标记的保留率98%以上。同时，实验证明，维生素K对抗排异作用有一定的增效。

复合荧光试剂还含有胆汁酸或甘氨胆酸0.5ug/ml～100ug/ml。本发明操作简单，快速，成本低，能满足批量半滑舌鳎苗种标记的需要。其还具有修复创面的作用，并且使标记后的鱼复壮较快。

荧光胶块长约5mm，宽度约2mm。标记步骤中，注射器的针头与半滑舌鳎鱼体呈5°~10°角刺入鱼体背鳍基部附近的表皮下组织，然后一边缓慢的拔出针头，一边将复合荧光试剂注入表皮下组织。

注射器的针头在使用前在90~95%的酒精中消毒10~15分钟；标记步骤完成后用浓度为20mg/L～50mg/L的高锰酸钾海水溶液对鱼体伤口液进行浸泡消毒，浸泡时间1~2分钟，再将标记鱼放入清洁海水中复苏。

与现有技术相比，本发明的优点在于：