[发明专利]一种用于过敏原筛查的活细胞分析系统

说明书

技术领域

本发明涉及了一种基于活细胞的分析系统及其制备方法，特别是涉及到一种基于邻苯二甲醛识别组胺等胺类的活细胞分析技术。

背景技术

过敏症是在全世界广泛流行的一类常见变态反应性疾病，由于其症状复杂，种类繁多，危害广泛且难以根治，成为长期以来医学界的一大难题。随着经济的发展和科技的进步，转基因作物逐步推广和转基因食品的日渐普及，食物过敏原已成为食品安全隐患之一。过敏症发病率的显著上升，已引起社会广泛的关注。过敏原是指能够选择性地激活CD4+Th2细胞及B细胞，诱导产生特异性IgE抗体应答，引起变态反应的抗原性物质。过敏原种类繁多，且对人群的危害越来越严重。在众多过敏原中，一般分为两大类：吸入性变应原和食入性变应原。一般地，引起食物过敏症发生的过敏原多数来源于食物中的蛋白质，实际上与过敏反应相关的仅为蛋白质表面的抗原决定簇。食品过敏原或混合物的分布范围非常广泛，目前大约有160种食品含有过敏原。随着转基因食品的普及，食品中越来越多地包含有经基因修饰的成分，这些外源基因产物有可能是已知或未知的过敏原。另一方面，化妆品中的过敏物质是困扰化妆品推广应用的天然障碍，每年因为化妆品过敏造成消费者投诉厂家的案件层出不穷，因此，在食品和医学上建立快速有效准确的过敏原检测技术是十分迫切并且具有重要意义的。

目前过敏原的检测方法主要有利用人血清特异性IgE检测法、动物抗体检测法、PCR法、组胺释放试验、过敏原指纹图谱法等。根据特异性IgE的血清学反应是主要的过敏原检测方法之一。对于引起产生过敏反应的过敏原必须测定特异性IgE与食品过敏原结合的能力，但是由于此方法是针对单个过敏病人的血清进行检测的，不是一种适合推广的检测方法。放射过敏原吸附抑制实验和酶标记过敏原吸附抑制实验技术是目前使用最广泛、最灵敏的方法，也是评价过敏原总致敏活性的关键技术。其优点是全自动技术，避免人工实验操作的误差，灵敏性和准确性也很高，但其主要不足是对人血清的依赖性，血清是很难保证一致的，因此这两种方法也难以标准化。

组胺释放实验主要是通过过敏原激发致敏的靶细胞，引起细胞释放组胺，组胺含量可应用荧光测定法、放射免疫法等方法测定，与适当参照进行比较，确定组胺释放率阳性标准，从而进行过敏原活性测定及鉴定的一类方法。通常用抗IgE抗体作阳性参照，以样品介质(如PBS)为阴性参照，以排除实验过程中组胺的非特异性释放。该实验共涉及细胞制备、组胺释放和检测三个步骤，不可控因素较多。因此，利用集成系统把细胞分析和组胺测定整合到一套系统上，既充分利用活细胞测定的实时、重现性好的优势，又实现测量的一致性。将活细胞固定在一定基质上，在流动相中实现外源物刺激、组胺释放与检测，建立集成式活细胞筛查系统。

发明内容

本发明的目的是提供一种活细胞筛查系统用于检测过敏原。

本发明的第二个目的是提供一种整合了细胞固定、过敏原刺激和组胺释放与测定的集成式过敏原检测装置。

本发明的技术方案概述如下：

一种用于过敏原快速筛查的活细胞系统，具体结构如下：

(1)由四层二甲基硅氧烷微晶片构成的三个腔室组成，各腔室通过硅烷毛细管相连接，第一层腔室有多个接口可以连接流动注射仪或注射器，第二层腔室为效应细胞腔室，第三层腔室为组胺反应池腔室。其中第一腔室为回行结构以增加液路长度。

(2)在(1)中的反应细胞腔室含有0.45μm的微孔滤膜，滤膜上方与第一腔室通过硅烷毛细管相连，下方与反应池腔室相连，含有细胞的溶液从第一腔室到达效应细胞腔室后，细胞被截留滤膜上，液体则可以通过滤膜从废液孔中排出。

(3)在(1)中的组胺反应池腔室与效应细胞腔室相通，待测溶液通过检测孔到达效应细胞腔室反应后，反应溶液通过滤膜到达组胺反应池腔室。

所述微晶片材料优选为二甲基硅氧烷、甲基硅氧烷。

所述腔室及液流通道优选用硅烷化修饰。

一种用于过敏原快速筛查的活细胞检测方法，具体步骤如下：

(1)制备效应细胞溶液，并通过活细胞染色法判断细胞存活状态，进行细胞计数后注入效应细胞腔室，活细胞被截留在滤膜上，通过细胞计数控制截留在了滤膜上的细胞数大于10^4.

(2)待测液与效应细胞持续充分反应后，溶液通过滤膜达到组胺反应池，与事先通过反应液注射孔引入的荧光衍生液充分反应3-5分钟，然后置于荧光显微镜下观察荧光强度，判断组胺产生情况从而判定反应液中是否含有过敏原。反应结束后，加入终止液洗去细胞