[发明专利]一种标准熔点高分辨率琼脂糖凝胶重复使用的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种标准熔点高分辨率琼脂糖凝胶(Nu Sieve3∶1琼脂糖凝胶)重复使用的方法。

背景技术

琼脂糖凝胶电泳是用琼脂或琼脂糖作支持介质的一种电泳方法，兼具电荷效应和分子筛效应，对于分子量较大的样品，如大分子核酸、病毒等，一般可采用孔径较大的琼脂糖凝胶进行电泳分离。但由于普通的琼脂糖凝胶孔径较大，适合200-50000bp的片段的分离，对小分子蛋白质及DNA的分离作用受限，而Nu Sieve3∶1琼脂糖凝胶的出现解决了这一问题。Nu Sieve3∶1琼脂糖属分子生物学级别，标准熔点，用于制备适于鉴定小片段DNA，RNA和≤1kb的PCR产物的高强度凝胶。主要用于分析电泳，以提高跑胶和印迹的速度。其性能检测确保10bp-1500bp范围的DNA片断均能获得良好的分辨效果。但因该胶成本高，实际科研活动中多采用聚丙烯酰胺凝胶电泳来分离小分子蛋白质和DNA。

聚丙烯酰胺凝胶电泳(Polyacrylamide gel electrophoresis，PAGE)技术要求高，需要摸索电泳条件以及染色条件。配液、制胶、灌胶、上样、刮胶、染色、保存等都需要结合实验者的体会以及实验室的设备来改良。相比之下，琼脂糖凝胶电泳的方法简便、普通，易于掌握。而在操作时间上，虽然现在实验室多用溴乙锭染色，大大缩短了染色时间，整个过程仍需要2h。而琼脂糖电泳只需要45min。PAGE垂直电泳，所需的试剂多，需要特殊的上样枪头，成本较高；琼脂糖凝胶电泳使用普通水平电泳仪即可。

高分辨率Nu Sieve3∶1琼脂糖凝胶电泳可以用来分离较小的、分子量范围为10-1000bp的DNA片段。Nu Sieve3∶1琼脂糖凝胶的原理是在琼脂糖的糖链上引入羟乙基，所制凝胶具有更高的筛过特性，更透明，是理想的DNA和RNA电泳产品，也适合组织培养细胞的克隆和病毒空斑分析。但由于该凝胶为进口产品，国内并无类似产品，一瓶250g的Nu Sieve3∶1凝胶价格约5000元，制作一块4％的Nu Sieve3∶1凝胶(5g/125ml，试剂成本100元/块，完成40-60个标本电泳)成本是制作一块12％聚丙烯酰胺凝胶(1元/块，完成8-10个标本)的100倍。因其性价比太低，国内实验室很少应用。

发明内容

本发明的目的在于克服上述不足，提供了一种Nu Sieve3∶1琼脂糖凝胶重复使用的方法，一块Nu Sieve3∶1琼脂糖凝胶可反复使用达十次以上，大大降低了DNA分离成本。

本发明提供的Nu Sieve3∶1琼脂糖凝胶重复使用的方法，包括以下步骤：

步骤1，将使用过的Nu Sieve3∶1琼脂糖凝胶加热熔解，加入水，制得胶液；

步骤2，将步骤1得到的胶液导入制胶槽内，重新制胶；

步骤3，进行水平电泳，对电泳结果进行判定。

优选地，步骤1、2和3重复1-15次，更优选重复1-10次。

优选地，步骤4中胶液体积与胶液中琼脂糖质量的比值为125mL∶5g。

优选地，所述方法还包括以下前步骤：

前步骤1，取Nu Sieve3∶1琼脂糖粉制备Nu Sieve3∶1琼脂糖凝胶；

前步骤2，对PCR产物进行Nu Sieve3∶1琼脂糖凝胶水平电泳，对电泳结果进行判定；

前步骤3，将步骤2使用后的Nu Sieve3∶1琼脂糖凝胶放入烧杯，盖上塑料薄膜，放置待用。

优选地，前步骤1中所述Nu Sieve3∶1琼脂糖凝胶为4％的Nu Sieve琼脂糖凝胶。

优选地，前步骤1中所述Nu Sieve3∶1琼脂糖凝胶由Nu Sieve3∶1琼脂糖和TAE缓冲液制成，其中Nu Sieve3∶1琼脂糖重量与TAE缓冲液的体积的比值为5g∶125mL。

优选地，所述TAE缓冲液为1×TAE缓冲液。

优选地，对电泳结果进行判定具体为：利用溴乙锭对电泳产物进行染色、摄片，进行基因型判读。

优选地，前步骤3中，放置时间不超过3周。

一般地，前步骤3中，放置时间可以为2-3周。

一般地，前步骤3中，放置温度为20-25℃周。