[发明专利]水稻转录因子Os01g64730基因的应用

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体地说，涉及水稻转录因子Os01g64730基因的应用。

背景技术

水稻(Oryza sativa L.)是我国和全世界最重要的三大粮食作物之一，是世界一半以上人口的主食，也是一个重要的功能基因研究的模式植物。与其相关的遗传学和分子生物学研究一直倍受研究者的重视，转录水平的调控是基因表达调控的重要方式。

干旱是全球范围内造成农作物减产的重要非生物逆境之一。随着全球人口数目的不断增加，粮食问题已经成了威胁着全人类生存的重大问题。因此改善农作物的抗旱性、提高农作物产量成了解决粮食危机的关键。随着基因工程和传统育种方法的结合，利用各种先进的分子生物学手段，挖掘抗旱基因，研究植物抗旱的分子生物学机理已经成为了培育抗旱新品种的重要手段。

植物体内存在复杂的逆境信号感知、传递系统。ABA(Abscisic acid)作为逆境信号响应中重要的植物激素，影响着植物体内逆境响应基因的表达。目前认为，植物对逆境胁迫的响应分为ABA-Dependent和ABA-Independent两条途径(Zhu2002;Shinozaki,Yamaguchi-Shinozaki et al.2003;Yamaguchi-Shinozaki and Shinozaki2006;Hirayama and Shinozaki2010)。在ABA-Dependent途径中，AREB/ABF(ABRE binding factor/ABRE-responsive elements binding protein)可以通过识别以ACGT为核心序列的ABREs(ABA-responsive elements)来调控依赖于ABA的下游基因表达，从而改变植物的生长发育状态，最终使植物体在逆境下生存下来。很多ABER/ABF都是具有Leu zipper domain的bZIP型转录因子，在植物中已得到了广泛的研究。

VP64是4个VP16功能域基序融合在一起组成的，是一类增强子。VP16最早在动物病毒基因中发现，现已被广泛应用到植物中，主要用于植物基因的转录调控的研究中。转录因子在体内的作用大体上可以分成两种：一种为转录增强子，另一种为转录抑制子。当转录因子和VP16功能域基序融合之后，它就会增强转录因子的功能，从而在转基因植株中出现更明显的表型变化。

发明内容

本发明的目的是提供水稻转录因子Os01g64730基因的应用。

为了实现本发明的目的，本发明首先提供了一种融合蛋白，所述融合蛋白为Os01g64730–Linker-（VP16）₄；

其中，Linker由11个柔性氨基酸串联而成，其氨基酸序列如SEQ ID No.9所示；VP16为来自单纯疱疹病毒的VP16蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID No.10所示；Os01g64730为水稻转录因子Os01g64730。

所述水稻转录因子Os01g64730的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。

其中，（VP16）₄即VP64，是由4个VP16功能域基序以GlySer间隔融合在一起组成的增强子，其氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。

本发明还提供编码所述融合蛋白的基因，以及在严格条件下，可与该基因的核苷酸序列杂交的核苷酸序列；其中，所述严格条件为65℃，在0.1×SSPE或0.1×SSC、0.1%SDS的溶液中杂交并洗膜。

本发明还提供含有编码所述融合蛋白的基因的载体。所述载体为任一种可引导外源基因在宿主中表达的载体。优选地，所述载体为植物双元表达载体（例如，pCAMBIA1301）。在将本发明编码所述融合蛋白的基因构建到植物表达载体中时，可在其转录起始核苷酸前添加任一种强启动子（例如，玉米强启动子Ubiquitin）或诱导型启动子。此外，在将本发明编码所述融合蛋白的基因构建到植物表达载体中时，还可以使用增强子，且这些增强子区域必须与编码序列的阅读框相同，以确保整条序列的翻译。