[发明专利]辅助鉴定H9亚型禽流感病毒的引物对及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种辅助鉴定H9亚型禽流感病毒的引物对及其应用。

背景技术

H9亚型禽流感是目前危害我国养禽业的主要疫病。H9亚型禽流感病毒可以感染多种禽和哺乳动物，并可导致禽类发病死亡，严重影响养禽业的健康发展。H9亚型禽流感感染导致肉鸡生长缓慢和蛋鸡产蛋率下降，给养禽业造成严重的经济损失。虽然我国已全面采取免疫措施，但H9亚型禽流感仍然在鸡群中反复发生。

对于传统的检测方法，如病毒分离、血凝抑制试验、神经氨酸酶抑制试验等，费时、费力。采用鸡胚进行病毒分离培养（需时2-3天），然后采用血凝抑制试验进行流感病毒亚型的鉴定（需时1天），难以做出快速而及时的诊断。此外，H9亚型禽流感病毒基因和抗原特性的变异，导致常规血清学方法及分子生物学监测方法无法检出流行毒株。因此，建立一种快速有效的鉴别流行毒株的诊断方法，对于及时采取有效控制措施和防止疫情扩散具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种辅助鉴定H9亚型禽流感病毒的引物对及其应用。

本发明保护特异引物对甲和特异引物对乙。

所述特异引物对甲由序列表的序列1所示单链DNA分子和序列表的序列2所示单链DNA分子组成。

所述特异引物对乙由与序列表的序列1所示单链DNA分子反向互补的单链DNA分子和与序列表的序列2所示单链DNA分子反向互补的单链DNA分子组成。

本发明还保护所述特异引物对甲或所述特异引物对乙在制备辅助鉴定H9亚型禽流感病毒的试剂盒中的应用。所述H9亚型禽流感病毒具体可为H9N2亚型禽流感病毒。

本发明还保护一种辅助鉴定H9亚型禽流感病毒的试剂盒，包括所述特异引物对甲或所述特异引物对乙。所述H9亚型禽流感病毒具体可为H9N2亚型禽流感病毒。

本发明还保护所述特异引物对甲或所述特异引物对乙在制备辅助鉴定待测样本中是否含有H9亚型禽流感病毒的试剂盒中的应用。所述H9亚型禽流感病毒具体可为H9N2亚型禽流感病毒。所述待测样本可为鸡的肝、脑、肺等组织，也可为鸡的口腔拭子、泄殖腔拭子等拭子样品。所述待测样本还可为食品，所述食品为鸡的内脏组织（肝、脑、肺等）或鸡的内脏组织（肝、脑、肺等）加工得到的生鲜食品或熟食。

本发明还保护一种辅助鉴定待测样本中是否含有H9亚型禽流感病毒的试剂盒，包括所述特异引物对甲或所述特异引物对乙。所述H9亚型禽流感病毒具体可为H9N2亚型禽流感病毒。所述待测样本可为鸡的肝、脑、肺等组织，也可为鸡的口腔拭子、泄殖腔拭子等拭子样品。所述待测样本还可为食品，所述食品为鸡的内脏组织（肝、脑、肺等）或鸡的内脏组织（肝、脑、肺等）加工得到的生鲜食品或熟食。

本发明还保护所述特异引物对甲或所述特异引物对乙在辅助鉴定H9亚型禽流感病毒中的应用。所述H9亚型禽流感病毒具体可为H9N2亚型禽流感病毒。所述应用中不包括疾病治疗和诊断方法。

本发明还保护一种辅助鉴定H9亚型禽流感病毒的方法，包括如下步骤：以待测病毒的cDNA为模板，用所述特异引物对甲或所述特异引物对乙进行PCR扩增，如果得到PCR扩增产物、待测病毒为候选的H9亚型禽流感病毒，如果没有得到所述PCR扩增产物、待测病毒为候选的非H9亚型禽流感病毒。所述H9亚型禽流感病毒具体可为H9N2亚型禽流感病毒。所述PCR扩增产物的大小可为400-500bp,具体可为473bp。所述待测病毒可为H9N2亚型禽流感病毒、鸡传染性支气管炎病毒、H4N6亚型禽流感病毒、H3N8亚型禽流感病毒、传染性喉气管炎病毒、减蛋综合症病毒或新城疫病毒。所述方法为非疾病治疗和诊断方法。

本发明还保护所述特异引物对甲或所述特异引物对乙在辅助鉴定待测样本中是否含有H9亚型禽流感病毒中的应用。所述H9亚型禽流感病毒具体可为H9N2亚型禽流感病毒。所述待测样本可为死亡的鸡的肝、脑、肺等组织，也可为死亡的鸡的口腔拭子、泄殖腔拭子等拭子样品。所述待测样本还可为食品，所述食品为鸡的内脏组织（肝、脑、肺等）或鸡的内脏组织（肝、脑、肺等）加工得到的生鲜食品或熟食。所述应用中不包括疾病治疗和诊断方法。