[发明专利]一种脱氧胆酸钠的分光光度检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测方法，具体地说，涉及一种脱氧胆酸钠的检测方法。

背景技术

脱氧胆酸钠，分子式：C₂₄H₃₉O₄Na，中文别名：3α，12α-二羟-5β-胆烷酸钠、去氧胆酸钠，分子量：414.55。脱氧胆酸钠是白色粉末或结晶性粉末。易溶于水，微溶于无水乙醇，不溶于乙醚。比旋光度约＋42.5°(c=2，水中)。低毒，半数致死量(大鼠，经口)为1370mg/kg。

脱氧胆酸钠分子能够改变磷脂酰基链的排列，影响其协同性，同时能够降低磷脂脂质体的稳定性。脱氧胆酸钠与磷脂双层膜作用后不仅仅是简单地镶嵌在磷脂膜上，而且能够使磷脂膜形成孔洞或缺陷。由于脱氧胆酸钠的上述特性，可以用于病毒或者细菌类疫苗生产过程中的细胞消化，抗原纯化与灭活，这些反应是一个复杂的生物物理变化过程，反应前后脱氧胆酸钠的结构和性质不发生变化。

生产上，在细菌类疫苗的生产过程中，发酵液采用脱氧胆酸钠进行灭活，而在病毒类疫苗的生产过程中也需要添加脱氧胆酸钠进行前期预处理。脱氧胆酸钠作为一种外源物质，自身具有一定的毒性。因此，在上述生物制剂有效成分的纯化过程中需对其进行去除，而若不能有效去除脱氧胆酸钠，可能造成脱氧胆酸钠含量过高从而导致对人体的毒副作用。因此为了有效控制产品质量，在生产过程有效地监控脱氧胆酸钠的去除趋势，检测纯化样品与终产品的含量或者含量，对疫苗的质控起着至关重要的作用。因而建立一种准确地测定生物制品中脱氧胆酸钠含量的方法对疫苗质量控制意义深远。

目前对生物制品中的脱氧胆酸钠含量的检测尚未有纳入到《中华人民共和国药典》2010年版三部的通用方法。根据《中华人民共和国药典》2010年版三部第124页甲型肝炎灭活疫苗(人二倍体细胞)附录1《脱氧胆酸钠残留量测定法》的方法进行多糖等样品中的脱氧胆酸钠含量测定时发现试验方法具有不适用性，不同样品的检测结果不同，添加的标准物质的检测结果普遍偏低，说明检测结果不准确。

因此，需要建立一种可以在普通实验室广泛使用，能够适用于不同样品，且检测灵敏度高的脱氧胆酸钠的检测方法。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种可以在普通实验室广泛使用，且检测灵敏度高的脱氧胆酸钠的检测方法。

为了实现本发明目的，本发明提供了一种脱氧胆酸钠的分光光度检测方法，所述分光光度检测方法的步骤为：

（1）绘制标准曲线：制备脱氧胆酸钠标准工作液，用所述的标准工作液配制一系列不同浓度的脱氧胆酸钠标准品，与硫酸溶液进行反应，分光光度计测定吸光值，以标准品中脱氧胆酸钠含量(μg/ml)为横坐标，以吸光值为纵坐标，作出标准曲线；列出线性方程及相关系数，要求相关系数R²≥0.98；

（2）对待测样品进行采样，制备加标样品；

（3）检测加标样品：步骤（2）所述加标样品与硫酸溶液进行反应，反应条件与步骤（1）相同，分光光度计测定吸光值；

（4）计算检测结果、分析样品脱氧胆酸钠的含量。

将各样品的吸光值代入脱氧胆酸钠标准曲线方程，计算待测样品中的脱氧胆酸钠含量，再乘以待测样品的稀释倍数即为该样本的脱氧胆酸钠的含量。

计算公式1：脱氧胆酸钠标准品以及样本脱氧胆酸钠浓度计算

y=ax+b，式中，

y——稀释后标准系列及样本在387nm处的吸光值；

x——稀释后标准系列及样本的脱氧胆酸钠浓度，μg/ml；

a——标准曲线的斜率；

b——标注曲线的截距；

计算公式2：样本脱氧胆酸钠含量计算

C=d×x，式中，

C——样本的脱氧胆酸钠含量，μg/ml；

d——样本的稀释倍数。