[发明专利]低背景的P16-INK4a染色试剂盒及其应用方法在审
| 申请号： | 201310200618.8 | 申请日： | 2013-05-27 |
| 公开（公告）号： | CN104155167A | 公开（公告）日： | 2014-11-19 |
| 发明（设计）人： | 徐显辉 | 申请（专利权）人： | 厦门菲尔科生物技术有限公司 |
| 主分类号： | G01N1/30 | 分类号： | G01N1/30;G01N1/31 |
| 代理公司： | 无 | 代理人： | 无 |
| 地址： | 361000 福建省厦门市海沧区新*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 背景 p16 ink4a 染色 试剂盒 及其 应用 方法 | ||
1.一种低背景的P16-INK4a染色试剂盒，其特征在于，包括：试剂A、试剂B、试剂C、试剂D；
其中，所述试剂A包括：P16-INK4a单克隆抗体、背景去除剂、稀释度1:1000-1:6000为0.05M PBS；
所述试剂B包括：生物素标记的二抗、背景去除剂；
所述试剂C包括: 辣根过氧化物酶标记的长臂链霉亲和素复合物；
所述试剂D包括: DAB显示液。
2.根据权利要求1所述的低背景的P16-INK4a染色试剂盒，其特征在于，所述背景去除剂为多种短链蛋白质混合物。
3.根据权利要求2所述的低背景的P16-INK4a染色试剂盒，其特征在于，所述背景去除剂包括牛血清白蛋白，兔肌动蛋白。
4.根据权利要求1所述的低背景的P16-INK4a染色试剂盒，其特征在于，所述DAB显示液为1滴DAB原液混合1ml DAB缓冲液；
其中，所述DAB缓冲液包括：咪唑 3.4g、蒸馏水1000ml、H2O2（浓度30%）2ml、6N盐酸调至PH=7.4；
所述DAB原液为125mM DAB配制，包括DAB1.5g、丙二醇19.5ml、6N盐酸 0.1ml。
5.一种权利要求1-4任一所述低背景的P16-INK4a染色试剂盒的应用方法，包括以下步骤：宫颈细胞涂片至水，抗原修复；
3%H2O2室温孵育5-10分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性；
蒸馏水冲洗，PBS浸泡5秒钟；
滴加试剂A，30min；
PBS冲洗，5秒钟；
滴加试剂B，10分钟；
PBS冲洗，5秒钟；
滴加试剂C，10分钟；
PBS冲洗，5秒钟；
滴加试剂D，显色3-5分钟；
自来水充分冲洗，复染，脱水，透明，封片。
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