[发明专利]一种检测蛋白水解酶活性的方法有效
| 申请号： | 201310184727.5 | 申请日： | 2013-05-17 |
| 公开（公告）号： | CN104165869A | 公开（公告）日： | 2014-11-26 |
| 发明（设计）人： | 杨光富;杨文超;孙琦;李俊;刘万年 | 申请（专利权）人： | 华中师范大学 |
| 主分类号： | G01N21/64 | 分类号： | G01N21/64;G01N33/52;C09K11/06 |
| 代理公司： | 北京润平知识产权代理有限公司 11283 | 代理人： | 王崇;刘国平 |
| 地址： | 430079 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 蛋白 水解 活性 方法 | ||
1.一种检测蛋白水解酶活性的方法，该方法包括将含有蛋白水解酶的待测样品与香豆素衍生物荧光探针接触，得到接触后的物料，检测接触后的物料在激发光下发出的荧光的强度，其特征在于，所述香豆素衍生物荧光探针为式（1）或式（2）所示结构的非肽香豆素衍生物；
式（1） 式（2）
其中，在式（1）中R1为甲基或乙基。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，在式（1）中R1为乙基。
3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述香豆素衍生物为式（1）所示结构，所述蛋白水解酶为弹性蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和羧肽酶中的一种或多种。
4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述香豆素衍生物为式（2）所示结构，所述蛋白水解酶为弹性蛋白酶。
5.根据权利要求1-4中任意一项所述的方法，其中，相对于1μM的蛋白水解酶，所述香豆素衍生物的用量为1-100μM。
6.根据权利要求1-4中任意一项所述的方法，其中，接触的条件包括：温度为25-37℃，pH值为6-8，时间为5-30min。
7.根据权利要求1-4中任意一项所述的方法，其中，所述激发光的波长为360-405nm，所述荧光的发射波长为500-520 nm。
8.一种检测样品中蛋白水解酶活性的试剂盒，该试剂盒包括：香豆素衍生物荧光探针以及待测蛋白水解酶的标准品；所述香豆素衍生物荧光探针为式（1）或式（2）所示结构的非肽香豆素衍生物；
式（1） 式（2）
其中，在式（1）中R1为甲基或乙基。
9.根据权利要求8所述的试剂盒，其中，在式（1）中R1为乙基。
10.香豆素衍生物荧光探针在制备检测样品中蛋白水解酶活性的试剂盒中的用途，所述香豆素衍生物荧光探针为式（1）或式（2）所示结构的非肽香豆素衍生物；
式（1） 式（2）
其中，在式（1）中R1为甲基或乙基。
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