[发明专利]一种生防菌枯草芽孢杆菌sbz-106和可湿性粉剂及应用

说明书

技术领域

本发明属于微生物农药技术领域，具体涉及一种防治菌核病的生防菌枯草芽孢杆菌sbz-106，还涉及一种防治菌核病的生防菌枯草芽孢杆菌sbz-106的制备方法，同时还涉及一种枯草芽孢杆菌可湿性粉剂，还涉及枯草芽孢杆菌的用途。 

背景技术

油菜是我国重要的油料作物及工业原料。油菜菌核病是由核盘菌[Sclerotinia sclerotioru m(Lib.)de Bary]引起的一种世界性病害，是我国油菜生产上的三大病害之一（陈利锋，2001），该病从油菜苗期到成熟期都可造成危害，严重影响着油菜的品质和产量，成为影响我国油菜高产、优质的关键因素。在一般年份，油菜菌核病的发病率为10%～30%，减产5%～7%。在发病重的年份，发病率高达80%，减产达30%～70%，含油量降低1%～5%（李国庆等，1995）。国内外的研究证实利用枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）防治菌核病是替代化学防治以及弥补抗病资源匮乏的重要措施，生物防治可以有效的避免使用化学农药带来的一系列环境和能源方面的问题，更有利于促进农业的可持续发展（于淑池，2004）。研究表明:枯草芽孢杆菌不仅对油菜菌核病有理想的防治效果，对多种植物病害均有防治效果。配制枯草芽孢杆菌可湿性粉剂可适用于田间土壤使用和喷雾使用。 

发明内容

本发明的目的是在于提供了一种枯草芽孢杆菌菌株，该菌株对核盘菌有强防治效果，可用于制备枯草芽孢杆菌的微生物制剂，该菌株已于2013年4月8日送交中国典型培养物保藏中心保藏，分类命名：枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）sbz106，CCTCC NO：M2013127，地址：中国武汉武汉大学。 

本发明还有一个目的是在于提供了一种枯草芽孢杆菌可湿性粉剂，该粉剂对作物菌核病高效，对人畜无毒；成本低；适合多种菌核病的防治。本发明的制剂生产中没有用到有机溶剂，降低了生产过程中和产品中的污染，也不会产生溶剂中毒，生产及使用均十分简单，具有生物农药对人畜安全的优点。 

本发明的最后一个目的是在于提供了一种枯草芽孢杆菌在制备治疗或预防核盘菌制剂药物中的应用。 

为了达到上述目的，本发明采用以下技术措施： 

一种枯草芽孢杆菌菌株，其筛选及鉴定过程为： 

1.枯草芽孢杆菌sbz-106菌株的分离筛选： 

枯草芽孢杆菌sbz-106分离与鉴定：申请人于2008年3月至5月从中国湖北省随洲采集健康的油菜植株上分离、筛选得到一株对核盘菌具有强防治效果的枯草芽孢杆菌菌株，申请人将其命名为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）sbz-106。本发明的枯草芽孢杆菌sbz-106分离和筛选采用稀释平板方法和平板拮抗的方法，菌种鉴定工作参照植物病理研究方法（方中达，1998），微生物学实验（赵斌和何绍江，2006）等书中的实验方法。 

2.枯草芽孢杆菌sbz-106菌学特征： 

（1）枯草芽孢杆菌sbz-106的形态学： 

枯草芽孢杆菌sbz-106在LB培养基（配方：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，补充蒸馏水至1000ml，调pH至7.0，在121℃高压蒸汽灭菌30min）上菌落接近圆形，中间部分有小颗粒状隆起，不透明，菌落乳白色。菌体直杆状，大小为（0.7-0.8）μm×（2-2.5）μm，革兰氏染色反应紫色，为阳性；产生芽孢，芽孢呈椭圆形近中生，但不产生荚膜，周生鞭毛。 

（2）枯草芽孢杆菌sbz-106菌株的遗传学特性： 

将sbz-106菌株于28℃180r/min培养24h，取1μl作为模板，对16S rDNA片段进行PCR扩增。引物设计和扩增条件参照细菌16S rDNA的通用引物和标准方法（见：Weisbur g et al.,1991），所述的引物DNA序列如下： 

正向引物：5′AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG3′ 

反向引物：5′ACG GTT ACC TTG TTA CGA CTT3′ 

序列分析表明16S rDNA扩增片段长度为1513bp，其序列如序列表SEQ ID NO：1所示。在NCBI网站（http://www.ncbi.nlm.nih.gov）进行BLAST分析，可知其与Bacillus subtilis菌株的相应序列的同源性为99%。 

（3）枯草芽孢杆菌sbz-106菌株生理生化特性：