[发明专利]靶向CD47阳性白血病细胞的溶瘤腺病毒构建方法及其用途无效
| 申请号： | 201310162299.6 | 申请日： | 2013-05-03 |
| 公开（公告）号： | CN103255170A | 公开（公告）日： | 2013-08-21 |
| 发明（设计）人： | 李恭楚;武虎;陈磊;梁天祥 | 申请（专利权）人： | 浙江理工大学 |
| 主分类号： | C12N15/861 | 分类号： | C12N15/861;C12N7/01;A61K48/00;A61P35/02 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 张法高 |
| 地址： | 310027 浙江省杭州*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 靶向 cd47 阳性 白血病 细胞 溶瘤腺 病毒 构建 方法 及其 用途 | ||
1.一种靶向CD47阳性白血病细胞的溶瘤腺病毒的构建方法，其特征在于，所述方法构建的溶瘤腺病毒携带sCAR-4N1表达框或溶瘤腺病毒携带外源抗癌基因表达框；具体的构建方法包括如下步骤：
1）构建sCAR-4N1的表达框；
2）酶切回收sCAR-4N1的表达框，插入到pXC2-sp-E1A质粒相应酶切位点, 获得pXC2-sCAR-4N1-sp-E1A质粒；
3） pXC2质粒在删除E1B后在原位置引入酶切位点，插入外源抗癌基因表达框构建得到pXC2-△E1B-gene质粒；通过酶切连接将pXC2-sCAR-4N1-sp-E1A质粒上的sCAR-4N1-sp片段置换到pXC2-△E1B-gene质粒上，构建得到pXC2-sCAR-4N1-sp-E1A-△E1B-gene质粒；
4）pXC2-sCAR-4N1-sp-E1A质粒及pXC2-sCAR-4N1-sp-E1A-△E1B-gene质粒分别和pBHGE3骨架质粒共转染包装细胞，在包装细胞内完成溶瘤腺病毒Ad.sCAR-4N1-sp-E1A和溶瘤腺病毒Ad.sCAR-4N1-sp-E1A-△E1B-gene的组装；
5）分离纯化溶瘤腺病毒Ad.sCAR-4N1-sp-E1A和/或溶瘤腺病毒Ad.sCAR-4N1-sp-E1A-△E1B-gene。
2.如权利要求1所述的靶向CD47阳性白血病细胞的溶瘤腺病毒的构建方法，其特征在于，所述的溶瘤腺病毒Ad.sCAR-4N1-sp-E1A和/或溶瘤腺病毒Ad.sCAR-4N1-sp-E1A-△E1B-gene是由肿瘤特异启动子控制复制的条件复制型腺病毒。
3.如权利要求1所述的靶向CD47阳性白血病细胞的溶瘤腺病毒的构建方法，其特征在于，所述的溶瘤腺病毒Ad.sCAR-4N1-sp-E1A和/或溶瘤腺病毒Ad.sCAR-4N1-sp-E1A-△E1B-gene是通过删除病毒基因获得的条件复制型腺病毒。
4. 如权利要求1所述的靶向CD47阳性白血病细胞的溶瘤腺病毒的构建方法，其特征在于，所述的外源抗癌基因包括IL-24、TRAIL、MnSOD、smac、p53、PPA中的一种或多种。
5.一种如权利要求1所述的方法构建的靶向CD47阳性白血病细胞的溶瘤腺病毒的用途，其特征在于，所述的溶瘤腺病毒Ad.sCAR-4N1-sp-E1A和/或溶瘤腺病毒Ad.sCAR-4N1-sp-E1A-△E1B-gene用于制备抗肿瘤药物。
6.如权利要求5所述的用途，其特征在于，所述的溶瘤腺病毒Ad.sCAR-4N1-sp-E1A和/或溶瘤腺病毒Ad.sCAR-4N1-sp-E1A-△E1B-gene与溶瘤腺病毒Ad-sCAR-IL3-sp-E1A和/或溶瘤腺病毒Ad-sCAR-IL3-sp-E1A-△E1B-gene联合制备抗肿瘤药物。
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