[发明专利]针对胱抑素C的单克隆抗体、杂交瘤细胞株制备及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及检测领域，尤其涉及针对胱抑素C的单克隆抗体、杂交瘤细胞株制备及其用途。

背景技术

随着生活水平的提高和生活节奏的加快，人们的生活方式、饮食结构近年来均发生了很大变化。在这种改变的影响下，肾脏疾病的发病率逐年增加，已成为威胁世界公共健康的最主要疾病之一。正常人群肾病发病率约6.1-10%，我国约有1亿肾病患者。肾脏作为人体主要的代谢和排泄器官之一，体内大部分物质要经过肾小球滤过和肾小管重吸收的作用。早期诊断是实现肾脏疾病早期治疗的关键，在肾脏疾病的发生早期，可以通过尿液中生物标志物蛋白含量的检测确定疾病发生的部位及程度。

胱抑素C(Cystatin C,Cys C)属于半胱氨酸蛋白酶抑制剂超家族的成员之一，位于人类第20号染色体，是由120个氨基酸组成的非糖基化蛋白，分子量13.3KDa。Cys C广泛存在于人类的体液中，特别是在脑脊液和精液中浓度最高。所有的有核细胞均可产生，生成速度稳定，不受炎症、胆红素、溶血、甘油三酯的影响，且与性别、年龄、肌肉量无关。

胱抑素C是近年来发现被广泛运用于临床的肾脏功能评价指标，由于其血清浓度与肾小球滤过率密切相关[Royakkers AA,van Suijlen JD,Hofstra LS,Kuiper MA,Bouman CS,Spronk PE,Schultz MJ:Serum cystatin C–A useful endogenous marker of renal function in intensive care unit patients at risk for or with acute renal failure?Curr Med Chem2007;14:2314–2317.]，因此其作为肾小球滤过功能指标的临床诊断价值已得到充分肯定。因胱抑素C在体内代谢途径，有人尝试研究尿液胱抑素C对于肾脏疾病诊断的临床意义，近年来已有大量文献相继报道了尿液胱抑素C作为肾脏损伤的标志物之一，在不同类型肾脏疾病诊断中的评价及应用突显了该指标的诊断价值。2002年FDA网上公布了26个在检验医学有重大突破的全新检测项目，血清CysC测定便是其中之一。2008年美国食品药品监督管理局(FDA)和欧洲药品管理局(EMEA)也把尿液胱抑素C列为七个反映肾损伤的生物标志物之一[Frank D.et al.Urinary clusterin,cystatin C,β2-microglobulin and total protein as markers to detect drug-induced kidney injury,Nature Biotechnology,2010(28):463–469.]。

特定的结合反应，例如抗原-抗体反应，己经广泛用于检测生物样品中存在的各种物质的免疫测试中。常用的技术包括酶联免疫吸附分析(ELISA)和胶体金免疫层析等。

酶联免疫吸附实验(Enzyme-Linked ImmunoadSorbent Assay，ELISA)是一种敏感性高、特异性强、重复性好的免疫学检测方法，其试剂稳定、易保存、操作简便、结果判断较客观，既可以做定性研究也可以做定量分析。其中，具备针对所检测目标的单克隆抗体是ELISA实验，尤其是双抗夹心法ELISA实验能否开展的关键条件。ELISA对目标抗原检测的灵敏度、特异性主要取决于其中所应用的抗体的性质和质量。

胶体金免疫层析技术是近年来发展起来的一种独特的免疫诊断技术，具有免疫反应和色谱层析的特定，与GC-MS比较，胶体金层析技术具有特异性强、灵敏度高、简单快速、易于操作、结果容易判读、无需任何仪器设各等优点。

虽然本领域虽然有一些检测检测胱抑素C的方法，因此其灵敏度和准确度还难以令人满意。因此本领域急需开发准确、特异性强、快速、灵敏地检测胱抑素C的抗体(尤其是可成对使用的单克隆抗体)和方法。

发明内容

本发明的目的是提供提供一种制备胱抑素C单克隆抗体方法和具有分泌抗胱抑素C单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

本发明的另一目的是提供检测胱抑素C的免疫检测试剂、免疫检测板和试剂盒。

在本发明的第一方面，提供了一种胱抑素C单克隆抗体，所述的抗体与胱抑素C亲和力为1.0×10^-10M至2.0×10^-9M。

在另一优选例中，所述的抗体由杂交瘤细胞株S-56-14CCTCC NO:C201334、或S-386-12CCTCC NO:C201335产生。