[发明专利]一种抗StxⅡ单克隆抗体

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗体，具体而言涉及一种抗StxII的鼠源抗体。 

背景技术

肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic E.coli，EHEC)感染是一种重要的人畜共患病，在世界各地包括发达及发展中国家都有流行，其感染具有暴发性、强烈的致病性与致死性等特点，已成为全球性的公共卫生问题，对人类健康构成巨大威胁。EHEC感染可使人患腹泻(Diarrhea)、出血性结肠炎(Hemorrhagic Colitis，HC)，还可引发溶血性尿毒综合征(Hemolytic Uremic Syndrome，HUS)、血栓性血小板减少性紫癜(Thromboric Thromobocytopenic Porpura，TTP)等严重并发症，特别是HUS可对患者肾脏造成不可恢复性的功能损伤，病死率较高。该致病菌自上个世纪80年代首次被发现以来，已经引起多次大规模暴发。[K C Kain，R L Barteluk，M T Kelly，et al.Etiology of childhood diarhea in Beijing，China.J.Clin.Microbiol.1991，29(1)：90-95]我国江苏、安徽及河南三省交界部分地区于1999-2000年多次暴发了EHEC O157:H7感染性腹泻病并发急性肾衰，先后共有230例患者发展成HUS，死亡205人，恢复者也造成了肾脏、及神经系统功能损伤等后遗症。美国2006年夏季也发生了由于食用污染的菠菜而导致EHECO157:H7感染事件，先后波及26个州，共有183人发病，29人引发HUS，3人死亡，引起世界广泛关注。2011年欧洲包括德国等在内的多个国家也暴发了人感染EHEC O104:H4事件。 

研究表明，EHEC感染的主要致病机理可分为两个方面，一是由菌体基因组毒力岛LEE(Locus of Enterocyte Effacement)编码的多种致病因子所介导的粘附抹平机制(Attaching and Effacing，A/E)，通过A/E机制，细菌可破坏肠上皮细胞，粘附并定植于肠道；二是分泌志贺毒素(Shiga toxin，Stx)，Stx可以穿越破损的肠上皮细胞进入血液循环，与其受体-丙糖酰基鞘氨醇Gb3或丁糖酰基鞘氨醇Gb4结合，造成肠道、中枢神经系统等器官的损伤，特别是Gb3受体含量较高的肾脏， 受损后易引发HUS，危及生命。 

该毒素分为Stx1和Stx2两个亚型，临床引起HUS的大多为Stx2。由于Stx是由整合到EHEC基因组中λ噬菌体基因编码，临床上某些抗生素的使用容易使残存的细菌进入应激状态，噬菌体从静止的溶源状态进入裂解状态，在肠道内产生大量的Stx毒素，并进入血液循环，使患者发生HUS。所以作为引发HUS的物质基础，Stx，特别是Stx2已成为诊断、治疗EHEC感染及其并发症的靶向分子。 

通过基因工程表达出功能性、全分子的Stx毒素几乎是不可能的，它受到了诸如A、B两个亚单位表达效率的匹配和后期的组装等条件的限制，因此对该毒素精确结构的解析必须依赖于天然毒素分子的提纯。在食品污染检测中也需要Stx2毒素标准品用于样品中志贺毒素毒素的定量。 

发明内容

为解决上述问题，本发明公开了一种单克隆抗体S2D8，所述抗体能够与II型志贺毒素特异性结合，可以用于志贺毒素的检测；此外，所述抗体与II型志贺毒素具有较高的亲和活性，所以还可以用于志贺毒素的纯化。 

本发明采用杂交瘤细胞技术，以纯化的II型志贺毒素为靶标，筛选鼠源抗体，获得一株具有结合活性的鼠源单克隆抗体分子S2D8。 

本发明所述的S2D8抗体分子可特异地捕捉志贺毒素，对利用该抗体纯化的StxII的毒性特征研究结果表明，毒素分子获得富集、纯化，具有明显的毒性特征，说明本发明所述的抗体纯化的毒素能保持天然活性。 

本发明公开了一种抗II型志贺毒素的鼠源单克隆抗体S2D8，所述单克隆抗体S2D8包括重链和轻链，其氨基酸可变区序列分别如序列表中SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4所示，其编码基因分别如序列表中SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3所示 

本发明还公开了上述单克隆抗体S2D8的制备方法，主要包括如下： 

1.抗StxII单克隆抗体杂交瘤细胞株的构建