[发明专利]IPV-DPT疫苗

说明书

本申请是国际申请日为2007年09月28日的申请号为200780036247.7的中国发明专利申请“IPV-DPT疫苗”的分案申请。

技术领域

本发明涉及混合疫苗，尤其是含有灭活的脊髓灰质炎病毒沙宾株(セービン株ポリオウイルス)(sIPV)的混合疫苗以及该混合疫苗的制备方法。

发明背景

脊髓灰质炎是脊髓灰质炎病毒引发的传染病。对于人而言，脊髓灰质炎病毒是经口感染，并在肠道增殖，经血液进入中枢神经系统的。进入中枢神经系统的脊髓灰质炎病毒通过在大型运动神经细胞中增殖，引起运动神经细胞变性、坏死，导致四肢发生急性弛缓性麻痹。此外，脊髓灰质炎病毒侵入延髓的呼吸中枢时，有时因呼吸麻痹而致死。为了抑制引发这些危重症状的脊髓灰质炎的发病，脊髓灰质炎疫苗广为使用。

可使用2种脊髓灰质炎疫苗：口服活脊髓灰质炎疫苗和灭活的脊髓灰质炎疫苗。口服活脊髓灰质炎疫苗是使用脊髓灰质炎病毒的弱毒株(沙宾株)的疫苗。口服给药的脊髓灰质炎病毒弱毒株引发通常的感染。口服活脊髓灰质炎疫苗来源的脊髓灰质炎病毒在人肠道大量增殖，其结果，在肠道局部形成免疫。另外，口服活脊髓灰质炎疫苗来源的脊髓灰质炎病毒进入血液中，通过引发病毒血症促进血中抗体的产生。但是由于脊髓灰质炎病毒弱毒株在中枢神经系统的增殖能力非常弱，通常不引起麻痹。此外，于被接种者的体内，在接种后约4～6周，口服活脊髓灰质炎疫苗来源的脊髓灰质炎病毒增殖，经排泄物排出。该排出的病毒感染被接种者周围对脊髓灰质炎免疫弱或无免疫的人，则与被接种者的情况相同，显示出赋予免疫或增强免疫的效果。

但口服活脊髓灰质炎疫苗来源的脊髓灰质炎病毒弱毒株在被接种者体内反复增殖期间，或在被所述排出的病毒感染的人的体内反复增殖期间，有时发生向强毒性转化的变异。在极少数情况下，该突变株导致疫苗相关的麻痹。

灭活的脊髓灰质炎疫苗是将脊髓灰质炎病毒经福尔马林灭活，失去感染力的疫苗。由于灭活的脊髓灰质炎疫苗不在被接种者体内增殖、不感染被接种者周围的人，不会导致疫苗相关的麻痹。制备灭活的脊髓灰质炎疫苗时，以往使用强毒株，近年来逐渐开发了弱毒株(沙宾株)(Biologicals34(2006)151-154，Dev Bil.Basel.Karger,2001,vol.105,pp163-169，临床和病毒Vol.30No.5(2002.12)336-343)。认为存在下述缺点：弱毒株(沙宾株)的增殖性稍弱于强毒株的增殖性。

含有百日咳菌的保护性抗原(防御抗原)、白喉类毒素(ジフテリアトキソイド)、以及破伤风类毒素(破傷風トキソイド)的疫苗作为百日咳白喉破伤风混合疫苗而广泛使用。

已知由无细胞性百日咳疫苗、白喉类毒素、破伤风类毒素以及灭活的脊髓灰质炎病毒构成的多价疫苗(特表2000-504032号公报)。

Vero细胞是绿猴肾脏来源的传代细胞，对各种病毒具有宽范围的敏感性，广泛用于病毒培养。文献公开了培养肠道病毒71疫苗的制备方法，该方法包括在微载体(マイクロキャリアー)上培养Vero细胞，用所培养的Vero细胞使培养肠道病毒71增殖(Optimization of microcarrier cell culture process for the inactivated enterovirus type71vaccine development:Suh-Chin Wu,etc.,Vaccine,22,3858-3864,2004)。文献还公开了使用微载体的通常的细胞培养条件(Microcarrier cell culture principles&methods:Pharmacia LKB,Biotechnology,1988)。

发明内容

在上述情况下，期望一种包括制备高效价的脊髓灰质炎病毒沙宾株的步骤，制备含有灭活的脊髓灰质炎病毒沙宾株(sIPV)和百日咳菌的保护性抗原、白喉类毒素、以及破伤风类毒素(DPT)的混合疫苗的方法。

为了解决上述问题，本发明者们经过潜心研究，结果发现通过在约4g/L～约6g/L的微载体存在下，培养待接种脊髓灰质炎病毒沙宾株的Vero细胞，可以制备高效价的脊髓灰质炎病毒沙宾株。基于这些发现，进行了反复研究，结果完成了本发明。

即，本发明提供：

(1)一种混合疫苗的制备方法，所述混合疫苗含有

(A)灭活的脊髓灰质炎病毒沙宾株、

(B)百日咳菌的保护性抗原、

(C)白喉类毒素、以及

(D)破伤风类毒素，

该方法包括下述步骤：