[发明专利]一种适用于免疫学快速检测的荧光微球及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物工程技术领域的荧光微球及其制备方法，尤其是一种适用于免疫学快速检测的荧光微球及其制备方法。 

背景技术

在生物和医学检测中，经常用到免疫分析法，它包括放射免疫分析、酶联免疫分析及免疫层析等方法。放射免疫分析和酶联免疫分析法需要昂贵的设备、专业的操作人员和复杂的操作步骤，难以快速得到检测结果。免疫层析法因具有操作简单、快速及成本底等特点，而常用于快速定性或半定量检测。 

免疫层析技术是出现于80年代初期的一种独特的免疫分析方式，它通常以条状纤维层析材料为固相，通过毛细作用使样品溶液在层析条上泳动，并同时使样品中的待测物与层析材料上针对待测物受体（如抗体或抗原）发生高特异、高亲和性的免疫反应。免疫层析技术常见的示踪粒子有胶体金、乳胶、胶体硒、明胶等，其中运用最成功的标记物为胶体金，例如已出现检测盐酸克伦特罗、乙肝表面抗原、黄曲霉毒素和促黄体激素等的胶体金试纸条。 

然而胶体金免疫层析技术检测灵敏度较低，在实际检测中只能对检测物进行定性或半定量，无法准确定量。目前，已有相关专利报道了以荧光纳米微粒为标圮物进行免疫层析检测，如公开号为CN1645146A的专利公开了一种用荧光稀土纳米颗粒作为标记物的免疫层析方法及其检测试纸条的制备；公开号为CN1866012A的专利公开了一种定量、快速的免疫检测方法及其专用装置，该方法将荧光物质螯合物Eu31-、SrTi3+、Tb3+、Dy3+与有机高分子纳米微粒结合，制备成荧光微粒，通过荧光检测来进行定量，但是这些荧光微球都是在紫外光源下激发，紫外光源的设置增加了检测仪器的成本。 

乳液聚合是指借助乳化剂的作用，在机械搅拌或振荡下，单体在水中形成乳液而进行的聚合.乳液聚合反应产物为胶乳，可直接应用，也可以把胶乳破坏，经洗涤、干燥等后处理工序，得粉状或针状聚合物。乳液聚合可以在较高的反应速度下，获得较高分子量的聚合物，物料的粘度低，易于传热和混合，生产容易控制，残留单体容易除去。乳液聚合的缺点是聚合过程中加入的乳化剂等影响制品性能。为得到固体聚合物，耗用经过凝聚、分离、洗涤等工艺过程。 

发明内容

本发明的目的在于，提供粒径稳定、光谱适用于可见发射光的适用于免疫学快速检测的荧光微球及其制备方法。 

本发明解决其技术问题所采用的荧光微球的制备方法如下： 

第一步：将内核为含有荧光分子的聚合物微粒和外壳含有修饰功能的官能团的烯烃单体为原料，通过微乳液聚合法制备得到外表面上具有修饰功能官能团的聚合物微球； 

第二步：将第一步得到的聚合物微球按1%（w/v）至5%（w/v）的比例缓慢注入含有荧光分子的丙酮或二氯甲烷溶液中，聚合物微球发生溶胀，荧光分子进入聚合物微球内，然后离心，除去上清液，清洗，加水悬浮，得到荧光微球。 

此项设置中由于微乳液聚合法为公知技术，因此不做具体的流程说明。 

本发明的进一步设置为：所述的聚合物微球为聚甲基丙烯酸甲酯的微球或甲基丙烯酸甲酯与其它单体共聚形成的共聚物的微球，甲基丙烯酸甲酯与所述其它单体的结构单元数均大于等于50，其中甲基丙烯酸甲酯单元的重量至少占荧光微球总重量的50%，所述的荧光分子的重量占荧光微球总重量的0.05%-5%。 

本发明的进一步设置为：所述的其它单体为选自氟乙烯、氯乙烯、溴乙烯、乙烯碘化、苯乙烯以及丙烯酸中的一种或多种。 

本发明的进一步设置为：所述的官能团为选自羧基，乙醇胺 基，羟基，胺基，氨基，亚胺基，环氧基，异氰酸酯基，金属醇盐及聚乙二醇基中的一种。 

本发明的进一步设置为：所述荧光分子为罗丹明、荧光素及其衍生物、肾上腺素染料及氟硼莹中的一种或多种，所述的荧光分子的重量占荧光微球总重量的0.2%—5%。 

本发明的进一步提供一种适用于免疫学快速检测的荧光微球为：包括核壳结构，所述的荧光微球的粒径为200～500nm，其内核为包含有荧光分子，外壳上具有修饰所述聚合物微球外表面上的一种或多种官能团。 

此项设置中所述官能团直接与配体或生物大分子反应形成微球表面的共价键连接，或在激活后与配体或者生物大分子进行共价标记。 

本发明的进一步设置为：所述荧光微球的粒径为380nm。