[发明专利]猪气喘病、猪传染性胸膜肺炎及猪肺疫三联检测试纸条

说明书

 

一、技术领域

本发明是一种涉及猪气喘病、猪传染性胸膜肺炎及猪肺疫检测试剂显示器具，特别是涉及一种可同时检测猪气喘病、猪传染性胸膜肺炎及猪肺疫的三联检测试纸条。

二、技术背景

猪肺疫又称猪巴氏杆菌病、锁喉风，是由多杀性巴氏杆菌引起的一种急性传染病。主要特征为败血症，咽喉及其周围组织急性炎性肿，或表现为肺、胸膜的纤维蛋白渗出性炎症。急性的常呈败血症病变，死亡率高，慢性的多与猪气喘病、猪瘟等混合感染或继发。本病是危害养猪业的常见传染病，分布很广，常继发于其他传染病，造成严重的经经济损失。

猪传染性胸膜肺炎是由猪胸膜肺炎放线杆菌引起猪的一种急性、热性、高度传染性的呼吸道疾病。临床上以急性出血性纤维素性胸膜肺炎和慢性纤维素性坏死性胸膜肺炎为特征。本病分布于世界许多国家和地区，是一种世界性疾病，目前呈上升的流行趋势，给规模化养猪场造成了重大的经济损失。

猪气喘病又称猪支原体肺炎是由猪肺炎支原体引起的一种慢性、接触性传染病，是一种重要的免疫抑制性疾病，也是猪呼吸道疾病综合征的重要病原之一。该病长期危害养猪业，并广泛分布于世界各国。临床上以咳嗽和气喘为主要症状，以融合性支气管肺炎为主要病变特征。主要危害是引起猪的生长受阻和饲料转化率大幅下降，高的发病率使其严重影响养猪业的经济效益。本病一旦传入猪群，很难清除。因此，对该病流行病学的认识以及诊断技术的研究和应用具有十分重要的意义。

猪气喘病、猪传染性胸膜肺炎及猪肺疫是一类严重危害养猪业健康发展的呼吸道疾病，上述疾病疫苗预防效果不佳，随着耐药菌株的不断出现，其治疗效果也不断下降。临床症状相似，鉴别诊断困难，给此类疾病的控制带来了难度。快速鉴别检测可为发病猪群的治疗和病原体的清除提供科学依据，是控制和消灭上述疾病的有效方法。目前对上述疾病的诊断方法主要有以下几种。

（1）病原体的分离培养与鉴定：猪肺炎支原体的分离培养十分困难，且生长缓慢，往往需要10d左右才能观察到细小的菌落。猪肺炎支原体的菌落很小，典型的菌落为圆形，边缘整齐，灰白色，半透明，中间凸起呈乳头状，表面常有许多小的颗粒，菌落大小在100～300nm 之间。在做液体培养时，可通过酚红指示剂能否使培养基颜色发生变化而判断有无菌体的生长，或将液体培养物作涂片，进行姬姆萨染色或瑞特氏染色，镜检观察。若有猪肺炎支原体感染，可见环状、电灯泡状等菌体结构。

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌分离培养，从新鲜的支气管、鼻腔分泌物或肺部病变分离病原体，无菌取病料接种于含5％绵羊血的琼脂平板上，并划十字线接种，在5％CO₂培养箱中37℃ 过夜培养后，见有1～1.5mm 圆形、中间凸起、边缘整齐、灰白色半透明菌落，菌落周围出现清晰的完全溶血环。对分离到的病原菌进行镜检，菌体呈革兰氏阴性，球杆状或细小杆菌，有时形成丝状，多形性，不形成芽孢，无运动性，有荚膜。

猪肺疫巴士杆菌分离培养，采取病料接种于麦康凯琼脂和血液琼脂平板，置于37℃恒温箱中，进行分离培养。在血液琼脂平板上生长，培养24h后，可长成淡灰白色，圆形、湿润、不溶血的露珠样小菌落。涂片染色镜检，为革兰氏阴性、两极浓染的小球杆菌。

（2）血清学检测：血清学检测是一种传统的检测方法，它是通过检测血清中抗体水平来判断猪是否患有上述疾病，主要包括间接血凝试验(IHA)、补体结合试验(CFT)、免疫荧光试验(IF)、酶联免疫吸附试验(ELISA)以及放射免疫酶试验(RIDEA)。

（3）聚合酶链式反应(PCR)技术：PCR技术具有高灵敏度、高特异性等优点，已被广泛运用于许多疾病的病原体鉴定和流行病学调查。上述疾病的病原体检测均可使用PCR技术，PCR检测病原体与ELISA检测相比，其检出率明显高于ELISA的检测率。

病原体培养与鉴定、血清学检测、聚合酶链式反应(PCR)技术，需要专业人员在实验室操作，操作繁琐，检测费时费力；而且需要昂贵的仪器设备，如PCR仪、酶标仪和CO₂培养箱等，对非专业人员而言，上述检测方法很难完成。虽然上述方法特异敏感，但每次只能检测一种猪病，且无法实现现场快速检测或诊断。本发明，研究一种简便快速、实时在线，同时检测三种猪病的三联检测试纸，对控制和消灭此类疾病意义重大。

三、发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术中检测猪病病原存在的缺点，提供一种特异、敏感、简便快速的呼吸道疾病检测方法，研制出一次可同时检测三种猪细菌性呼吸道疾病的三联检测试纸。