[发明专利]一种蓖麻转基因抗性植株的炼苗移栽方法

说明书

技术领域

本发明属于蓖麻转基因抗性植株的炼苗移栽技术领域，特别涉及一种蓖麻转基因抗性植株的炼苗移栽方法。

背景技术

植株转基因幼苗比一般植物组织培养的幼苗弱，比正常用种子繁殖的植株更弱。因为蓖麻在组织培养时，幼芽或幼苗继代时会出现容易死亡现象，所以，经农杆菌介导法获得的蓖麻转基因抗性材料的幼苗不能在多次继代后在组织培养条件下长成较大的苗再移栽，而是在极其弱小的时候就需要驯化移栽，甚至没有生根就要移栽。如何提高柔弱的蓖麻转基因抗性幼苗的移栽成活率，就成为能否获得转基因蓖麻的一个技术瓶颈。

一般植物组织培养植株炼苗的过程：拿掉封瓶口的塑料膜，在培养基表面加上薄薄一层自来水，置于散射光下3-5天即可。有些植物试管苗极易萎蔫，封口膜在炼苗开始时只能半开，且要求炼苗环境有较高的相对湿度。喜光植物可在全光下炼苗，耐荫植物则须在较隐蔽的地方炼苗。移栽时先要轻轻地但彻底地洗掉沾在根上的琼脂培养基，以免栽后发霉。要选用排水性和透气性良好的移栽介质，例如蛭石、河沙、珍珠岩、草炭和腐殖土等，栽苗之前须用0.3%-0.5%高锰酸钾进行土壤消毒。移栽后，最初10-15天要通过喷雾或罩上透明塑料膜以保持很高的湿度（90%-100%），这对移栽的成功是非常重要的。在塑料膜上可打些小孔，以利气体交换。在移栽时把小植株的一部分叶片剪掉也可能是有益的。在保湿数天之后，可把植株搬入温室，但仍须遮荫数日。总之，移栽苗成活的必要条件是：空气湿度高，土壤通气好，太阳勿直照。移栽后要完成上述各个步骤可能需花费4-6周的时间，此后即可让这些植物在正常的温室或田间条件下生长^[1]。

上述方法的缺点

（1）最初10-15天要通过喷雾或罩上透明塑料膜以保持很高的湿度（90%-100%）：蓖麻转基因植株及其柔弱，保湿10-15天，时间远远不够，需要更长时间。

（2）在移栽时把小植株的一部分叶片剪掉也可能是有益的：由于蓖麻转基因植株及其柔弱，甚至无根，所带有的叶片也非常小，一旦叶片去掉，就无法进行光合作用，因此，蓖麻转基因叶片移栽时不能去掉。

（3）移栽后要完成上述各个步骤可能需花费4-6周的时间，此后即可让这些植物在正常的温室或田间条件下生长：蓖麻转基因植株移栽后，到在正常的温室或田间条件下生长，所需要的时间是8-10周。

（4）一般植株移栽后不需要另外浇营养物质，蓖麻转基因植株必须要浇一些营养物质才能由弱苗长成壮苗，之后才能正常生长。

国内对蓖麻组织培养幼苗的炼苗移栽方法，是把长度为3-4cm的芽带有健壮根系的完整再生小植株移栽到装有混合土壤的盆中，移栽成活率达到100%，生长迅速^[2]。国外对蓖麻再生植株的移栽，是将带根的植株移植到泥炭–蛭石中培养^[3]。

发明内容

本发明针对经农杆菌介导法获得的蓖麻转基因抗性材料的幼苗移栽成活率低的现状，摸索出一种成活率高的蓖麻转基因柔弱植株的炼苗移栽方法，该方法适用于所有的农杆菌介导法获得的蓖麻转基因抗性材料的幼苗。

本发明提供的蓖麻转基因抗性植株的炼苗移栽方法，包括：

（1）炼苗

蓖麻转基因柔弱抗性材料的炼苗：培养瓶中的蓖麻转基因抗性苗到了继代时间以后仍不继代，在培养瓶中再培养10天；将培养瓶从培养室移到缓冲间，放置5天，其中，培养室温度为25℃，缓冲间为室温。注意炼苗期间不要将培养瓶的封口膜打开，以防污染导致幼苗死亡。

（2）移栽