[发明专利]一种阿旁宫寿组培再生体系建立的方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术、植物茎尖培养技术，主要是一种阿旁宫寿组培再生体系建立的方法。

背景技术

阿旁宫寿属百合科十二卷属（Haworthia）多肉植物,其叶片肥厚多汁，窗面晶莹透明，并具有城墙纹理，规整美丽，为优良的多肉植物品种。由于其自然繁殖率低，且原产地不在我国，加之人类过度采掘和对其生境的破坏，目前数量较少、市售价格居高不下，使其推广受到限制。因此，利用植物组织培养技术进行阿房宫寿的快速繁殖，对于保存优良种质资源、繁殖名优珍稀品种具有重要的意义，以实现其规模化生产以满足国内外市场的需求。植物组织培养方法可以在短期内快使植物速繁殖，不仅繁殖速度块，且因为是无性繁殖可以保持与母株的一致的遗传性状。但是，在此之前还没有关于建立阿房宫寿组培再生体系的报道，更没有成功的实例。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在的不足，而提供一种阿旁宫寿组培再生体系建立的方法。

本发明的目的是通过如下技术方案来完成的。该阿旁宫寿组培再生体系建立的方法主要包括如下步骤：

1）、培养基的配制：

（1）基本培养基：MS培养基，其中蔗糖20～30g/L，琼脂5～9g/L，pH=5.8;

（2）诱导培养基：MS+6-BA4～8mg/L+NAA0.05～0.5mg/L;

（3）分化培养基：MS+6-BA0.05～0.5mg/L+NAA0.05～0.5mg/L;

（4）增殖培养基：MS+6-BA0.5～1.0mg/L+NAA0.05～0.2mg/L;

（5）壮苗培养基：MS+6-BA0.05～0.1mg/L+NAA0.05～0.1mg/L;

2）外植体的选取与灭菌：取阿房宫寿的幼嫩花序，将花蕾清洗消毒后备用；

3）愈伤组织的诱导及增殖：将步骤2）消毒处理后的花蕾在无菌条件下接种于诱导培养基上，经1～2个月后诱导出愈伤组织，将愈伤组织转接到新鲜的诱导培养基上进行增殖培养；

4）不定芽的分化及增殖：将步骤3）愈伤组织在无菌条件下转接到分化培养基上，培养20～40天后分化出不定芽，将不定芽丛切割成小丛后转接到增殖培养基上以丛生芽方式增殖；

5）壮苗培养：将步骤4）丛生芽在无菌条件下切割成单株后转接到壮苗培养基上，培养30～50天后其植株直径可大3～5cm;

6)移栽：将步骤5）壮苗切除根部后清洗并晾干，然后移栽至多肉植物颗粒土基质中栽培。

进一步地，本发明在所述步骤1）中，所述的培养基包括基本培养基和组培各阶段培养基的组分具体为：

（1）基本培养基：MS培养基，其中蔗糖20～30g/L，琼脂5～9g/L，pH=5.8;

（2）诱导培养基：MS+6-BA6mg/L+NAA0.5mg/L;

（3）分化培养基：MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.2mg/L;

（4）增殖培养基：MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L;

（5）壮苗培养基：MS+6-BA0.05mg/L+NAA0.05mg/L;

进一步地，本发明在所述步骤2）中，所述的消毒处理是去除花序上闭合花蕾的外包片，再将花蕾连同部分花葶逐个切下，先用浓洗衣粉溶液浸泡20～60min后再用自来水冲洗干净，然后依次在体积比为70%的酒精和有效氯浓度为1%的次氯酸钠溶液中分别浸泡0.5～1min和4～7min，最后用无菌水冲洗3～5次；

进一步地，本发明在所述步骤3）中，所述消毒处理后的花蕾，先用解剖刀将其基部切伤后接种于诱导培养基上，并使伤口接触到培养基。

进一步地，本发明在所述步骤6）中，所述切除根部的壮苗清洗后置于通风避光处3～10天晾至微微皱缩后移栽至多肉植物颗粒土基质中栽培。

进一步地，本发明在所述步骤3）中，所述的培养条件是，培养温度为23±2℃、光照强度为30～60μmol·m^-2·s^-1、光照时间为8～10小时/天；

进一步地，本发明在所述步骤4）、5）中，所述的培养条件是，培养温度为23±2℃、光照强度为80～120μmol·m^-2·s^-1、光照时间为8～12小时/天；