[发明专利]抗人LOC339524蛋白的单克隆抗体、杂交瘤细胞株及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药工程技术，特别是涉及抗人LOC339524蛋白的单克隆抗体、杂交瘤细胞株及其用途。 

背景技术

人LOC339524(Genbank)基因位于染色体1p22.3位点上，由39,440个碱基组成。LOC339524蛋白心、脑、肺、肝等重要脏器都有表达，而且主要在细胞核内表达，部分组织细胞浆内也有表达，并能释放到血清中。LOC339524蛋白的功能尚不清楚。免疫检测技术是基于抗原—抗体反应的原理对待测物（抗原/抗体）进行定量定性分析的检测方法，具有特异性强、灵敏度高、便捷等优点，是现代生命科学的重要研究手段，在生物分析检测领域有着广泛的应用前景。构建基于免疫检测技术的LOC339524蛋白检测体系对于深入研究LOC339524蛋白的分布、功能和作用机制等都具有重要的意义，同时具有巨大的社会和经济价值。目前国内外均未发现有关于LOC339524蛋白的抗体。因此，制备高特异性的LOC339524单克隆抗体成为迫切需要。 

发明内容

基于上述领域的空白，本发明提供一种制备抗人LOC339524蛋白的单克隆抗体的方法，由该方法获得一株特异性好、效价高的产生抗人LOC339524蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株。技术方案具体如下： 

一种制备抗人LOC339524蛋白的单克隆抗体的方法，包括如下步骤： 

（1）制备免疫原， 

（2）免疫动物，进行细胞融合得杂交瘤细胞， 

（3）培养杂交瘤细胞，分离杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体， 

其特征在于：所述免疫原是氨基酸序列如Seq ID No.5所示的重组融合蛋白。 

所述筛选原是氨基酸序列如Seq ID No.6所示的重组融合蛋白。 

所述免疫动物指所述免疫原免疫Balb/c小鼠。 

所述免疫原与等量的弗氏完全佐剂乳化，乳化完成后，以四肢皮下多点注射加腹腔注射途径对Balb/c小鼠进行基础免疫，2周后，将免疫原与等量的弗氏不完全佐剂乳化，以四肢皮下多点注射加腹腔注射途径对Balb/c小鼠进行追加免疫；2周后，再采用同样方式追加免疫一次。 

上述任一方法产生的杂交瘤细胞株。 

所述杂交瘤细胞株，名称为5-D3，保藏号为CCTCC C201330。 

一种抗LOC339524蛋白的单克隆抗体，由权利要求6所述的杂交瘤细胞株5-D3所分泌产生。 

所述的单克隆抗体的作为抗原抗体反应中识别LOC339524蛋白的抗体的用途。 

一种检测LOC339524蛋白的试剂盒，其特征在于，在采用酶联免疫原理检测LOC339524蛋白的试剂盒中，包被抗体采用权利要求7所述的单克隆抗体。 

本发明的第一贡献在于提供了一种制备抗LOC339524蛋白的单克隆抗体的方法，其要点在于：本发明设计并制备的免疫原及免疫方法能够有效制备出效价高、特异性好的单克隆抗体，具体如下：发明人从GENEBANK中获得人LOC339524蛋白的核苷酸编码序列（Seq ID No.1），通过分析选取LOC339524蛋白分子中第75-106位氨基酸的蛋白片段作为免疫单位，通过人工设计的连接蛋白基因序列将3段编码该免疫单位的基因序列连接起来获得LOC339524免疫蛋白基因序列（如Seq ID No.4所示）。本发明通过将Seq ID No.1及Seq ID No.4所示的基因分别克隆原核表达载体PET32a中构建原核表达重组质粒。将重组质粒稳化到BL21（DE3）中，表达人LOC339524重组蛋白及LOC339524免疫重组蛋白。本发明将LOC339524免疫重组蛋白作为免疫原免疫小鼠。将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞细胞进行融合，筛选得到杂交瘤细胞。。 

本发明的第二个贡献在于，基于上述方法，获得了一株经验证，并进行专利保藏的杂交瘤细胞株，能分泌相应的LOC339524蛋白特异性单克隆抗体，经亚类鉴定均为IgG2b，单抗效价均在1：20万以上，亲和力分别为7.2×10¹⁰M^-1，特异性鉴定表明该株单克隆抗体均具有较高的特异性。 

保藏信息如下： 

分类命名：杂交瘤细胞株5-D3 

保藏号：CCTCC No:C201330 

保藏日期：2013年3月10日 

保藏单位：中国典型培养物保藏中心 

保藏单位地址：中国武汉武汉大学430072