[发明专利]厌氧超低温菌种保藏剂

权利要求书

1.厌氧超低温菌种保藏剂，其特征在于：该保藏剂由以下体积百分比的原料组成：营养肉汤20.0~21.1%、保护剂26.3~30.0%、分散剂30.0~31.5%以及去离子水19.3~21.4%。

2.如权利要求1所述的厌氧超低温菌种保藏剂，其特征在于：所述营养肉汤由0.3~1.0%的多肽类物质、1.0~1.6%的蛋白质类物质及97.5~98.7%的去离子水按质量百分比混合而成；所述多肽类物质是指牛肉膏粉、酵母浸粉、麦芽汁浸粉中的一种或几种；所述蛋白质类物质是指蛋白胨、鱼粉、蚕蛹粉中的一种或几种。

3.如权利要求1所述的厌氧超低温菌种保藏剂，其特征在于：所述保护剂由35.0~40.0%的醇类、35.0~40.0%的抗冻剂、20.0~25.0%的脂肪酸类按质量百分比混合而成；所述醇类是指丙三醇、异丙醇、丙二醇中的一种或几种经80.0℃鼓风干燥过夜后得到的无水醇；所述抗冻剂是指亚砜、二甲基亚砜、二甲基砜中的一种或几种；所述脂肪酸类是指亚油酸、亚麻酸、共轭亚油酸中的一种或几种。

4.如权利要求1所述的厌氧超低温菌种保藏剂，其特征在于：所述分散剂由65.0~68.0%的蛋白质类、31.4~34.4%的糖类、0.3~0.5%的谷氨酸钠、0.15~0.3%的L-半胱氨酸按质量百分比混合而成；所述蛋白质类是指全脂牛奶、脱脂牛奶中的一种或几种；所述糖类是指乳糖、麦芽糖、果糖中的一种或几种。

5.如权利要求1或2所述的厌氧超低温菌种保藏剂，其特征在于：所述去离子水为无氧的去离子水，且其电阻值为18.0兆欧。

6.如权利要求1所述的厌氧超低温菌种保藏剂的制备方法，包括以下步骤：

⑴量取35.0~40.0%醇类和35.0~40.0%抗冻剂于烧杯Ⅰ中，充分混合后转移至锥形瓶Ⅰ中，在常温常压下加热煮沸的同时通入无氧氮气进行除氧，然后用可调定量加液器等量分装于2只无氧的厌氧瓶Ⅰ中，标记为A瓶，加塞封口，经115.0℃高压蒸汽灭菌30分钟后备用；

⑵量取97.5~98.7%、电阻值为18.0兆欧的去离子水于烧杯Ⅱ中，按照顺序依次将0.3~1.0%多肽类物质、1.0~1.6%蛋白质类物质、31.4~34.4%糖类、0.3~0.5%谷氨酸钠和0.15~0.3% L-半胱氨酸加入所述烧杯Ⅱ，充分溶解后转移至锥形瓶Ⅱ中，在常温常压下加热煮沸的同时通入无氧氮气进行除氧，然后用可调定量加液器等量分装于2只无氧的厌氧瓶Ⅱ中，标记为B瓶，加塞封口，经115.0℃高压蒸汽灭菌30分钟后备用；

⑶量取按体积百分比占保藏剂19.3~21.4%的去离子水在常温常压下加热煮沸的同时通入无氧氮气进行除氧，然后用可调定量加液器等量分装于2只无氧的厌氧瓶Ⅲ中，标记为C瓶，加塞封口，经115.0℃高压蒸汽灭菌30分钟后备用；

⑷用无氧氮气填充厌氧瓶Ⅳ进行除氧，经115.0℃高压蒸汽灭菌30分钟后完全干燥备用；一次性无菌注射器经115.0℃高压蒸汽灭菌30分钟后完全干燥备用；

⑸将所述厌氧瓶Ⅰ、厌氧瓶Ⅱ、厌氧瓶Ⅲ、厌氧瓶Ⅳ及所述一次性无菌注射器放到厌氧手套箱中，打开紫外灯灭菌30分钟；

⑹调整所述厌氧手套箱中无氧氮气流量，使其达到完全无氧后，在出气端连接0.22μm的微孔空气滤膜，以用来过滤无氧氮气；

⑺用一次性无菌注射器将所述A瓶和所述B瓶所对应的溶液混合到提前备好的除氧瓶Ⅳ中混合均匀；

⑻无菌条件下量取65.0~68.0%蛋白质类，并用0.22μm的微孔滤膜过滤除菌，在常温常压下加热煮沸除氧，然后在通入无菌无氧氮气的条件下冷却至室温，用所述一次性无菌注射器分装于所述厌氧瓶Ⅳ中混合均匀；

⑼无菌条件下称取20.0~25.0%脂肪酸类，用所述C瓶厌氧瓶Ⅲ中已灭菌的无氧去离子水溶解，同时在常温常压下加热煮沸除氧，然后在通入无菌无氧氮气的条件下冷却至室温，用所述一次性无菌注射器分装于所述厌氧瓶Ⅳ中混合均匀，做标记后于4.0℃低温保存即可。