[发明专利]鸡蛋参多倍体的诱导方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地涉及一种鸡蛋参多倍体的诱导方法。 

背景技术

鸡蛋参（Codonopsis convolvulacea Kurz.），又名聂哇，为桔梗科植物。其为多年生缠绕性草本，有白色乳汁。茎细软，径约1mm，分枝多数，平滑。叶小，长卵形或披针形，顶端钝，基部圆形或宽楔形，边缘具疏齿，长1.5～2cm，宽6～7mm，腹面绿色，背面淡绿色，两面无毛，背面主脉和支脉较清晰，柄细，长2～3mm。花单一，顶生，蓝色；花梗长，花长约2cm，细弱；花萼陀螺形，裂片5，开展，长圆形，顶钝；花冠辐射状，基部连合，长圆形，长约1cm，顶端近圆形；雄蕊内藏，花药明显，比花丝长，长3～4mm，棍棒状；子房3室，半下位，柱头3裂，裂片长圆状卵形，表面有毛。一般分布于西藏南部、四川西部、云南等地。生于海拔1200～4000m的山地草坡或灌丛中。其药用部分为根块，根块近于卵球状或卵状，长2.5～5cm，直径1～1.5cm，表面灰黄色，上端具短细环纹，下部则疏生横长皮孔，干燥时表皮呈不规则开裂。质硬。味微苦而涩。 

《晶珠本草》记载：聂哇治感冒、胸急热痛。本品生长在草木丛间，攀援其他植株而生，鳞茎个大，味甚甘，花状如蓝紫菀花。《形态比喻》记载：聂哇生长在阴山坡，叶细，花状如绿绒蒿的花，蓝色，攀援其他植株而生，根状如酥油皮袋，功效增强嗅觉，开胃，止呃逆。《自然之底》记载：聂哇治脉寒症。《蓝琉璃》记载：聂哇攀援农作物生长，常生于阴面山坡。根如一圆团，味较甘；叶细，色绿，状如新鲜的马兜铃(藏药名：哇力嘎)；花近似于绿绒蒿。其种子治脉热病、心热病。《祖先口述》记载：聂哇治胸刺痛、感冒。本品攀援农作物而生长，花蓝色。 

植物的多倍体植物多倍体在自然界分布广泛，据估计被子植物多倍体频率达70%-80%。植物多倍体具有一些比二倍体物种更适应生存环境的优势，例如叶片变大变厚，茎杆变粗，植株高大，花器变大，果实变大，种子变大。多倍体植物的巨大性能大幅提高药材的产量，如同源四倍体丹参普遍比原二倍体丹参生长势旺，茎杆粗壮、植株高，根部 药材比原植物粗大。箱蓝同源四倍体较原植物叶子宽大而厚实，茎杆粗壮，花、果实也略显增大。怀牛膝川同源四倍体根的干重较二倍体有显著提高。四倍体金银花“九丰一号”比二倍体增产58.7%。四倍体粉葛比野生二倍体生物产量提高十几倍。由于多倍体的以上多种优势，开发新的多倍体中药药材是有价值的。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种鸡蛋参多倍体的诱导方法。 

本发明提供的技术方案如下： 

一种鸡蛋参多倍体的诱导方法，包括如下步骤： 

（1）切取新鲜健壮的鸡蛋参茎段，消毒后转接入初代培养基当中，所述的初代培养基为1/2MS+6-BA（6-苄氨基嘌呤）0.5mg/L+IBA（吲哚丁酸）0.2mg/L； 

（2）等鸡蛋参茎段在初代培养基上长出芽后，将芽和茎段接入继代培养基MS+6-BA0.2mg/L+IBA 0.5mg/L或愈伤组织诱导培养基MS+6-BA 1.0mg/L+IBA 0.5mg/L中培养，使其愈伤组织长出； 

（3）选取生长状态良好的愈伤组织，用秋水仙素0.01%-0.1%处理24h-120h；将处理好的愈伤组织转接入鸡蛋参的继代培养基（MS+6-BA 0.2mg/L+IBA 0.5mg/L）当中； 

(4)静置培养，等长出幼苗之后，用流式细胞仪检测确认四倍体。 

步骤（1）的消毒为鸡蛋参茎段在流水下冲洗20-30分钟，再在超净工作台内酒精15S，1%升汞8到15分钟，再用蒸馏水清洗至少2次。 

步骤（2）的培养为光培养或暗培养。MS+6-BA0.2mg/L+IBA0.5mg/L和MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.5mg/L当中，分别进行光培养和暗培养。芽跟茎段均可以诱导出愈伤组织和新芽。暗培养过程中，继代培养基和愈伤组织诱导培养基中，都只有愈伤组织长出，而光培养过程中，既有愈伤组织也有芽长出。 

在本发明的较佳实施例中，还包括步骤（5），将确认为多倍体的鸡蛋参植株进行扩大繁殖。 

与现有技术相比，本发明具有如下效果：以鸡蛋参茎段出发，诱导出愈伤组织，再从愈伤组织获得四倍体鸡蛋参。本发明可以实现四倍体鸡蛋参的快速繁殖。 

附图说明

图1中，A为外源茎段，B为茎段上长出愈伤组织。 

图2中，A、B、C分别为本发明3个处理样品的愈伤组织；D为多倍体苗。