[发明专利]一种红花组织培养快速繁殖方法

说明书

技术领域：

本发明属于农业栽培技术领域，涉及一种红花组织培养快速繁殖方法。

背景技术：

红花(Carththamus tinctorius.L)是菊科一年生草本植物，具有抗旱、耐盐碱、耐瘩薄等特性，是一种集药材、油料、饲料和染料为一体的特种经济作物。红花花冠富含黄酮类物质和红花黄色素，既是传统的中药材，具有活血化疲、通经止痛之功效，又是纯天然色素和理想的食品添加剂的原料。红花油既是高血压、冠心病等心脑血管病患者所必需的特殊保健品，又是大众化的优质保健食用油。

近年来组织培养技术在药用植物上得到了广泛的应用，这为繁殖能力较差的名贵中药药用资源的保存和生产提供了新的途径。利用生物技术、组织培养的方法进行种苗生产，在很多植物上已成为工厂化的商品生产，并带来了丰厚的经济效益。

因此，采用组织培养的方法，进行红花愈伤组织诱导、丛生芽的诱导以及球茎的再生，是探索快速、大量、持续地获得有效新生球茎的途径。利用组织培养的方法建立优系番红花的繁殖体系，进行种苗的工厂化育苗生产，具有快速大量繁殖优系品种的优势，可以解决红花的种质资源质量问题。为了探索扩大种源的途径，采用组织培养技术进行了红花愈伤组织及小球茎诱导进行研究，以期为其种质资源的保存与利用奠定一定的基础。

发明内容：

本发明所要解决的技术问题在于，研究建立红花无菌快繁体系，并提高增殖率，适宜大规模生产优质种苗。

本发明提供一种红花组织培养快速繁殖方法。本发明利用组织培养的方法，进行了红花愈伤组织及小球茎诱导，建立优系红花的繁殖体系，进行种苗的工厂化育苗生产，快速大量繁殖优系品种。

本发明所述方法包括下列步骤：

(1)外植体灭菌：将球茎用水洗净，除去皮膜，置于超净工作台上消毒接种；先于70％酒精中漂洗30-40秒，再用0.1％HgCl₂消毒8-10分钟，最后用无菌水冲洗4-5次，彻底洗去残余的HgCl₂，将消毒后的球茎切成1-1.5cm³，接种于培养基上；

(2)愈伤组织诱导：将经过消毒灭菌后的上述球茎在无菌环境中接种于诱导培养基Ms+0.5mg/LNAA+5.0mg/L6-BA培养基上中，培养20天收获愈伤组织；

(3)丛生芽诱导培养：将愈伤组织接种到Ms+0.5mg/LNAA+2.0mg/L6-BA培养基上，20天后在黑暗条件(24h无光照)下，20℃培养，可诱导出大量丛生芽；

(4)不定芽继代培养：将丛生芽切割成单个芽后转接到Ms+0.5mg/LNM+2.0mg/L6-BA培养基上，在黑暗条件下，20±2℃培养，15天后芽长到2-3cm；

(5)球茎诱导培养：当芽高2-3Cm时转接到Ms+0.5mg/LNM+3.0mg/L6-BA培养基，在光照条件(光照时间12h/d，光照强度1500-2000lx)下诱导出球茎。本发明方法所述培养基MS、NAA和6-BA均可从市售得到。

具体实施方式：

实施例1

(1)以当年生红花的球茎为外植体，将球茎于自来水中冲洗干净，除去皮膜，置于超净工作台上消毒接种。先于70％酒精中漂洗305，再用0.1％HgCl₂消毒8-10min，最后用无菌水冲洗5次，彻底洗去残余的HgCl₂。

(2)将消毒后的球茎切成IC扩大小，接种于MS+0.5mg/LNAA+5.0mg/L6-BA培养基上，在黑暗条件(24小时无光照)下培养20天可收获愈伤组织。愈伤组织可在此条件下长期继代，不褐化。

(3)将愈伤组织转接到MS+0.5mg/LNAA+2.0mg/L6-BA培养基上，20天后在黑暗条件下，20℃培养，可诱导出大量丛生芽。

(4)将丛生芽切割成单个芽后转接到MS+0.5mg/LNAA+2.0mg/L6-BA培养基上，在黑暗条件(24小时无光照)下，20℃培养，15天后芽长到ZCm。

(5)转接到MS+0.5mg/LNAA+3.0mg/L6-BA培养基，在光照条件(光照时间12小时/天，光照强度1500lx)下诱导出球茎。