[发明专利]壳聚糖纳米粒、防治甜菜夜蛾的生物农药制剂及其制备方法

权利要求书

1.一种壳聚糖纳米粒，其特征是，其由以下重量百分比的原料组成：

壳聚糖0.5-5%、助溶剂1-10%、防冻剂0-5%、表面活性剂0.1-1%、乳化剂0.1-0.5%、缓冲液40-60%、余量为水。

2.根据权利要求1所述的壳聚糖纳米粒，其特征是，所述助溶剂为聚乙二醇200、聚乙二醇400、乙醇、丙二醇中的一种或者几种混合物。

3.根据权利要求1所述的壳聚糖纳米粒，其特征是，所述防冻剂为丙三醇、乙二醇、异丙醇、二甘醇中的一种或者几种混合物。

4.根据权利要求1所述的壳聚糖纳米粒，其特征是，所述表面活性剂为吐温20、吐温40、吐温60、吐温80中的一种或者几种混合物。

5.根据权利要求1-4任一项所述的壳聚糖纳米粒，其特征是，所述乳化剂为三聚磷酸钠、苄基二甲基酚聚氧乙烯醚、烷基苯磺酸钙、苯乙基酚聚氧乙烯醚、烷基酚聚氧乙烯醚甲醛缩聚物、苯乙基酚聚氧乙烯聚氧丙烯醚、壬基酚聚氧乙烯醚磷酸酯、苯乙基聚氧乙烯醚硫酸铵盐、烷基联苯醚二磺酸镁盐中的一种或者几种混合物；所述缓冲液为醋酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液或柠檬酸盐缓冲液的一种或者几种混合物。

6.一种防治甜菜夜蛾的生物农药制剂，其特征是，其主要由以下重量百分比的成分组成：

（A）0.05-15%的有效成分:针对甜菜夜蛾高效致死靶基因设计合成siRNA，所述siRNA为15-50nt的双链核糖核酸、

（B）19.95-55%溶剂、

（C）30-80%权利要求1-5任一项所述的壳聚糖纳米粒。

7.根据权利要求6所述的防治甜菜夜蛾的生物农药制剂，其特征是，所述甜菜夜蛾高效致死靶基因为钙粘蛋白基因、肌动蛋白基因、细胞色素P450基因、G-蛋白偶联受体基因。

8.根据权利要求7所述的防治甜菜夜蛾的生物农药制剂，其特征是，所述siRNA为选自针对钙粘蛋白基因的双链核糖核酸为SEQ ID NO.1及SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3及SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6；针对肌动蛋白基因的双链核糖核酸为SEQ ID NO.7及SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9及SEQ ID NO.10中；针对细胞色素P450基因的双链核糖核酸为SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16；和针对G-蛋白偶联受体基因的双链核糖核酸为SEQ ID NO.17及SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.19及SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.21及SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.23和SEQ ID NO.24、SEQ ID NO.25和SEQ ID NO.26、SEQ ID NO.27和SEQ ID NO.28中的一对或多对。

9.根据权利要求6-8任一项所述的防治甜菜夜蛾的生物农药制剂，其特征是，所述溶剂为甲醇、二甲亚砜、水、Tris缓冲液中一种或者几种混合物。

10.一种权利要求6-9任一项所述的防治甜菜夜蛾的生物农药制剂的制备方法，其特征是，包括以下步骤：

（A）溶解：称取所述siRNA，溶于溶剂，搅拌，使所述siRNA充分溶解，得溶液；

（B）壳聚糖纳米粒制备：

1）称取所述壳聚糖、助溶剂和防冻剂，加入到缓冲液中，搅拌使其充分溶解，得溶液1；

2）将溶液1离心，取上清，加入表面活性剂，充分搅拌，混匀，得溶液2；

3）将乳化剂用水溶解后加入溶液2中，混匀即得壳聚糖纳米粒；

（C）制剂制备：将步骤（A）中所得溶液与步骤（B）所得的壳聚糖纳米粒混合均匀，即得所述防治甜菜夜蛾的生物农药制剂。