[发明专利]牛或羊玻璃酸酶生产工艺

权利要求书

1.一种牛或羊玻璃酸酶生产工艺，包括A步骤原料预处理，其特征是还包括以下主要步骤：

B、匀浆

经所述A步骤处理的睾丸与0.1~0.5摩尔每升的乙酸-乙酸钠溶液混合，放入组织捣碎机中，搅拌均匀；

C、超声波浸提

将步骤B处理得到的匀浆液泵入超声波提取机中，在15～55千赫兹下超声波浸提15～30分钟，浸提后过不低于100目的网筛，得到的沉淀物进行二次提取，浸提步骤为先B后C，合并两次浸提得到的滤液；

D、搅拌提取

将步骤C得到的滤液泵入搅拌缸中，加入0.1~0.5摩尔每升的氯化钠，持续搅拌3~6小时，搅拌结束后低温离心，弃去沉淀得到玻璃酸酶粗酶液1；

E、硫酸铵除杂

F、硫酸铵沉淀

G、透析

本步骤用到的蒸馏水需要提前预冷，温度为4℃；

将步骤F得到的沉淀用所述蒸馏水溶解后装入截留分子量为10~14kDa的透析袋，在透析缸中搅拌透析2~5小时，低温离心后将清液过滤，滤膜的孔径为0.2~0.45微米，得到玻璃酸酶粗酶液2；

H、阳离子交换色谱层析

步骤H和I由联合色谱层析系统完成；纯化步骤描述如下：

平衡预装柱：用纯化样品的平衡液或洗脱液通过平衡柱，当电导率检测线，pH值检测线，紫外检测线都保持平直1~2小时后，平衡预装柱完成；

进样：样品由进样泵流入预装柱，进样完成后将预装柱封口待用；

洗脱：设定好色谱层析系统的参数，洗脱缓冲液进入分离柱开始洗脱样品，被洗脱的液体由自动收集器收集；

阳离子交换色谱层析纯化步骤如下：

平衡阳离子交换预装柱，将玻璃酸酶粗酶液2进样后用50~100毫摩尔每升的乙酸-乙酸钠溶液洗脱杂质，洗脱20~50分钟，洗脱液更换为50~100毫摩尔每升的乙酸-乙酸钠溶液，洗脱前在该溶液中加入氯化钠，使氯化钠的浓度为0~1摩尔每升，洗脱流速每分钟5~13毫升，洗脱时间3~8小时，洗脱后测定每个收集管的酶活力，将有活力的液体全部混合后备用；

I、凝胶过滤色谱层析

平衡凝胶过滤预装柱，将步骤H得到的混合液，经步骤G透析后为凝胶过滤预装柱进样，用50~100毫摩尔每升的乙酸-乙酸钠溶液洗脱，洗脱前在该溶液中加入氯化钠，使氯化钠的浓度为0~0.5摩尔每升，洗脱流速每分钟1~2毫升，洗脱时间2~4小时，洗脱后测定每个收集管的酶活力，将有活力的液体全部混合后用于步骤J；

J、真空冷冻干燥。