[发明专利]一种通过培养葛根细胞制备黄酮的方法

权利要求书

1.一种通过培养葛根细胞制备黄酮的方法，其特征在于，将葛根愈伤组织细胞接种在灭菌后的培养基上，并在23-27℃温度、800-1200lx光照强度下，以每天8-12小时光照时间培养15-20天，然后分离提取获得黄酮；

所述培养基由NH₄NO₃、KNO₃、MgSO₄·7H₂O、CaCl₂·2H₂O、KH₂PO₄、FeSO₄·7H₂O、EDTA-Na₂、KI、CoCl₂·6H₂O、H₃BO₃、Na₂MoO₂·2H₂O、MnSO₄·H₂O、CuSO₄·5H₂O、ZnSO₄·7H₂O、6-（苄胺基）嘌呤、2,4－二氯苯氧乙酸、蔗糖、琼脂组成，pH值为5.8。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述培养基由以下方法制备获得：

以质量百分浓度计，配制由8.25%的NH₄NO₃、9.50%的KNO₃、1.85%的MgSO₄·7H₂O和余量水组成的第一溶液；

配制由2.51%的CaCl₂·2H₂O和余量水组成的第二溶液；

配制由0.85%的KH₂PO₄和余量水组成的第三溶液；

配制由0.139%的FeSO₄·7H₂O、0.187%的EDTA-Na₂和余量水组成的第四溶液；

配制由0.00415%的KI、0.00012%的CoCl₂·6H₂O、0.031%的H₃BO₃、0.00125%的Na₂MoO₂·2H₂O、0.0845%的MnSO₄·H₂O、0.00012%的CuSO₄·5H₂O、0.043%的ZnSO₄·7H₂O和余量水组成的第五溶液；

配制由0.5%的肌醇、0.0025%的烟酸、0.0025%的盐酸吡哆醇、0.0005%的盐酸硫氨素、0.01%的甘氨酸和余量水组成的第六溶液；

分别取第一溶液、第二溶液、第三溶液、第四溶液、第五溶液和第六溶液各20mL，然后加入6-（苄胺基）嘌呤、2,4－二氯苯氧乙酸、蔗糖以及琼脂定容至1000mL，其中6-（苄胺基）嘌呤浓度为10^-6M，2,4－二氯苯氧乙酸浓度为1.5×10^-5M，蔗糖质量百分浓度为3%，琼脂质量百分浓度为0.75%，然后调pH值为5.8高压灭菌后即得培养基。

3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述葛根愈伤组织细胞通过将葛根外植体进行培养，然后进行愈伤组织培养后获得。

4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述光照强度为1000lx。

5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述光照时间为10小时。

6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述温度为25℃。

7.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述培养时间为16-19天。