[发明专利]CA19-9定量检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物物质检测分析领域，特别涉及一种CA19-9定量检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

在过去二三十年以来，恶性肿瘤发病率一直呈上升的趋势，每年以3％至5％的速度增加，成为人类死亡的重要原因。以2002年为例，当年全世界新发肿瘤是1100万例，死亡病例达到700万，治愈和带瘤生存达2500万。肿瘤的早期诊断和治疗对提高治愈率、改善生活质量和延长生存期至关重要。肿瘤标志物的血清含量水平一般与恶性肿瘤的发生、发展、消退、复发等有良好的相关性，检测这些肿瘤标志物的血清水平，对相关恶性肿瘤的早期诊断、治疗效果和预后转归判断等有重要参考价值，目前已在临床广泛应用。

肿瘤标志物是指在肿瘤发生和增殖过程中，由肿瘤细胞本身合成、释放或者由机体对肿瘤细胞反应而产生的一类物质。1978年由Herberman在美国召开的人类免疫与肿瘤免疫诊断会上提出，次年在英国第7届肿瘤发生生物学和医学会议被确认并开始引用。糖类抗原CA19-9是一种重要的肿瘤标志物之一。CA19-9是一种粘蛋白型的糖类蛋白肿瘤标志物，为细胞膜上的糖脂质，因由鼠单克隆抗体116NS19-9识别而命名。CA19-9是迄今报道的对胰腺癌敏感性最高的标志物。在血清中它以唾液粘蛋白形式存在，分布于正常胎儿胰腺、胆囊、肝、肠和正常成年人胰腺、胆管上皮等处，是存在于血液循环的胃肠道肿瘤相关抗原。大部分胰腺癌患者血清CA19-9水平明显增高。如果以正常参考范围上限(37U/mL)为诊断标准，敏感性和特异性均可达90％以上。CA19-9水平与肿瘤的阶段有关，血清中含量的高低提示手术的难易程度。术前CA19-9水平对预后有一定提示作用，低者预后较好，术后CA19-9水平降至正常者生存期长于未下降者。肿瘤复发时，CA19-9可再度升高，并且发生于影像学诊断之前。因此，CA19-9水平还可用作监测肿瘤的复发。

目前发现的用于肿瘤筛查诊断的标志物大都在患者体内含量很低，一般的检测方法不够敏感，难于精确定量测定。因此，敏感、准确、简便、快速的肿瘤标志物检测方法具有十分重要的临床应用价值。

发明内容

本发明实施例提供一种CA19-9定量检测试剂盒及其制备方法，用于解决现有技术中无法实现定量测定微量标志物的技术问题。

本发明提供的一种CA19-9定量检测试剂盒，包括：多个浓度不同的CA19-9校准品，CA19-9抗体包被的微孔板，CA19-9抗体的酶标记物，发光底物液和浓缩洗涤液。

其中，多个CA19-9校准品为6个，浓度为0U/mL、5U/mL、30U/mL、100U/mL、200U/mL和400U/mL。包被微孔板的包被浓度为5μg/mL。CA19-9抗体的酶标记物为采用戊二醛二步法标记的辣根过氧化物酶标记CA19-9抗体，稀释倍数为1∶2000。发光底物液为鲁米诺发光底物液，鲁米诺发光底物液包括底物A液和底物B液，其中底物A液包括1.8g/L的鲁米诺和0.2g/L的对碘苯酚，底物B液包括0.5g/L的过氧化脲。

本发明还提供一种CA19-9定量检测试剂盒的制备方法，包括：制备多个浓度不同的CA19-9校准品；制备CA19-9抗体包被的微孔板；制备CA19-9抗体的酶标记物；制备化学发光底物液；以及制备浓缩洗涤液。

其中，制备多个浓度不同的CA19-9校准品包括：通过稀释配制6个校准品，浓度为0U/mL、5U/mL、30U/mL、100U/mL、200U/mL和400U/mL。

制备CA19-9抗体包被的微孔板包括：将浓度为5μg/mLCA19-9抗体加入微孔板，置于4℃冰箱24小时；去除微孔板中的包被液后加入封闭液，置于4℃冰箱封闭24小时；去除微孔板中的封闭液后，置于37℃孵育箱8小时烘干。

制备CA19-9抗体的酶标记物包括：通过戊二醛二步法制得辣根过氧化物酶标记的辣根过氧化物酶标记CA19-9抗体，稀释倍数为1∶2000。

化学发光底物液为鲁米诺化学发光底物液，鲁米诺化学发光底物液包括底物A液和底物B液；底物A液用0.05M pH8.6的Tris-HCl缓冲液溶解鲁米诺和对碘苯酚制得，其中鲁米诺浓度为1.8g/L，对碘苯酚浓度为0.2g/L；底物B液用0.05M pH8.6的Tris-HCl缓冲液稀释过氧化脲制得，其中过氧化脲的浓度为0.5g/L。

本发明通过采用多个校准品和增强型发光体系，具有灵敏度高，线性范围宽，光信号持续时间长，分析简便快速，结果稳定，误差小，安全性好，使用期长的有益效果。