[发明专利]一种荧光检测次氯酸根的方法

说明书

技术领域

本发明涉及次氯酸根检测技术，具体属于一种以分散紫26为荧光试剂，快速、定量荧光检测次氯酸根的方法。

背景技术

NaOCl被广泛用于漂白剂和消毒剂，其浓度范围为10^-5～10^-2mol/L。但是，浓缩的次氯酸盐溶液对人类和动物的健康有潜在的危害。另一方面，次氯酸根是一个重要的生物活性氧物种（ROS），它在免疫系统中起着关键的作用。生物体内的次氯酸根对生命体是必不可少的，具有重要的抗菌性能。然而，异常的次氯酸盐浓度可以导致组织损伤和疾病，如肝缺血再灌注损伤，动脉粥样硬化，肺损伤，类风湿心血管疾病，神经元变性，关节炎和癌症。因此，灵敏的和高选择性的用于次氯酸盐检测的探针是非常需要的。而检测环境和生物样品中的次氯酸根，如天然水和自来水也是生化研究的兴趣所在。近年来，荧光探针备受关注。然而，大多数荧光探针一般涉及复杂和高成本的有机合成。因此，发展用商业可得、廉价的试剂，操作方便、选择性高、灵敏度高的次氯酸根定量检测方法尤为重要。

发明内容：

本发明的目的是为了克服现有技术次氯酸根检测中存在的问题，提供一种体系廉价、操作方便、选择性高、灵敏度高的荧光检测次氯酸根的方法。

本发明将商业可得的分散紫26作为荧光试剂在检测ClO^-中应用。分散紫26的结构式：

本发明提供的一种荧光检测ClO^-的方法，步骤为：

（1）、配制pH=7.0、浓度为10mM的HEPES缓冲溶液，并用乙醇配制2mM的分散紫26乙醇溶液；

（2）、按体积比400:7将HEPES缓冲溶液和分散紫26乙醇溶液加到干净的荧光比色皿中，在荧光分光光度仪上检测，随着待测样的加入，625nm的荧光强度逐渐减弱；

（3）、用蒸馏水配制2mM的ClO^-溶液，把2mL的HEPES缓冲溶液和35μL的分散紫26乙醇溶液加到荧光比色皿中，逐渐加入ClO^-溶液的体积为25、50、100、200、300、400、500、600uL，同时在荧光光谱仪上测定625nm的对应的荧光强度F为566、530、492、397、323、213、23，以ClO^-浓度为横坐标，以相对荧光强度F₀-F(F₀﹦588)为纵坐标绘制图，得到ClO^-浓度的工作曲线；线性回归方程为：F₀-F=2.164+0.929c(c的单位为10^-6mol/L)；

（4）、将HEPES缓冲溶液2000uL和分散紫26乙醇溶液35uL加到干净的荧光比色皿中，用微量进样器吸取V ul待测样品溶液，加入到此干净的荧光比色皿中，在荧光分光光度仪上检测，将测得的荧光强度代入步骤（3）的线性回归方程，得到浓度c，待测样品C_待测样=2000uL×c×10^-6/VuL，即可求得ClO^-的浓度。

经实验证明，其它分析物不干扰体系对ClO^-的测定。

与现有技术相比，本发明具有如下优点和效果：1、检测体系成本低廉，试剂商业可得且廉价；2、本发明的检测方法，对ClO^-显示了高的灵敏性和选择性；3、检测过程在水相中进行；4、检测手段简单，只需要借助荧光光谱仪即可实现。

附图说明：

图1实施例1分散紫26与ClO^-作用的荧光发射图

图2实施例2分散紫26与各种分析物的荧光柱状图

图3实施例3工作曲线

图4实施例4细胞成像图

具体实施方式：

实施例1

配制pH=7.0、浓度为10mM的HEPES缓冲溶液，并用乙醇配制2mM的分散紫26溶液；把2mL的HEPES缓冲溶液及35μL的分散紫26乙醇溶液加到干净的荧光比色皿中，取ClO^-的溶液，逐渐用微量进样器加到此比色皿中，边加样边在荧光分光光度仪上检测，随着ClO^-的加入，625nm处荧光强度逐渐减弱。荧光发射图见图1。

实施例2