[发明专利]枯草芽孢杆菌A16的制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及益生菌领域及其增强动物健康或动物的一般身体状况的能力。 

  

背景技术

在我国，抗生素等抗菌药物的滥用造成了药物残留以及大量耐药性细菌产生，其结果严重阻碍了畜、禽、水产养殖业的健康持续发展，为食品安全和消费者的身体健康埋下了隐患，因此寻找安全、无残留的抗生素替代品迫在眉睫。目前的研究证实，包含益生菌的生物饲料添加剂是一种十分理想的抗生素替代品。 

芽孢杆菌(Bacillus) 属包含众多在农业和动物营养等领域中具有繁多用途的内生孢子形成细菌。数种芽孢杆菌株目前在市场上用作动物饲料中的益生菌而作为抗生素的替代品。这些益生菌通过调整胃肠道菌群来增强动物健康，包括改善动物生长及饲料效率。由于对用于人类消费的动物产品中的抗生素残余物及对抗生素耐药性的发展的担忧，增加了对此类益生菌的使用。近年来已进行了工作来筛选用作益生菌的孢子形成细菌。尽管各种商业产品中含有枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、藓样芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)及凝结芽孢杆菌株(Bacillus coagulans)，此种筛选揭示出并非所有的芽孢杆菌株均是有效的饲料添加剂。 

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) 具有多种功能，是一种可以应用于多个领域的优良菌种，例如可以作为微生物农药、微生物饲料添加剂、生物有机肥接种剂、净水剂等。它的主要功能有抑制有害细菌( 大肠杆菌、沙门氏菌) 生长，预防腹泻、下痢等疾病；分泌蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等消化酶，降解动植物性饲料中复杂的有机物，促进消化吸收，提高饲料利用率；安全高效，无药残，无毒副作用，促进动物生长，增强动物免疫力和抗病力；减少粪便中氮、磷、钙的排泄量，减少有害气体排放，降低养殖场所氨气、吲哚等有害气体的浓度，改善养殖环境；分解水体中的残饵、粪便、死藻等，维护水质，减少病害，减小换水量，提高水产动物免疫力、抗病力，提高成活率。 

枯草芽孢杆菌A16（Bacillus subtilis A16），保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：M 209105。 

枯草芽孢杆菌A16抑菌谱广，可抑制玉米大、小斑病，对玉米大斑病菌、玉米小斑病菌、玉米弯孢叶斑病菌、棉花黄萎病菌、小麦赤霉病菌、香蕉炭疽病菌和香蕉枯萎病菌也均有较强的拮抗作用，防治效率高（CN 101698829 B）。目前尚未见枯草芽孢杆菌A16应用于畜牧领域报道，其无毒无害，环境安全性好，可增强畜禽健康，故而可应用于微生态制剂领域，具有良好的应用前景。 

发明内容

本发明的首要目的在于提供枯草芽孢杆菌A16 的制备方法。 

本发明另一个目的是提供上述枯草芽孢杆菌A16及其代谢产物在畜禽和水产养殖中的应用。 

本发明的枯草芽孢杆菌A16及其代谢产物可用于制备饲料添加剂。 

其中，本发明的枯草芽孢杆菌A16及其代谢产物在用于制备饲料添加剂中，主要用于畜、禽或水产养殖的饲料添加剂，如：鸡、鸭、猪、牛、羊、鱼等的饲料添加剂。 

本发明还提供包含该枯草芽孢杆菌的饲料添加剂，其特征在于枯草芽孢杆菌的添加量为10⁸-10¹¹CFU/Kg。 

优选地，枯草芽孢杆菌的添加量为10¹⁰CFU/Kg。 

其中，发酵枯草芽孢杆菌A16时用的发酵培养基由如下成分组成：蔗糖10g/L，蛋白胨5g/L，牛肉膏5g/L，酵母浸粉1.5g/L，硫酸锰0.0004g/L，pH7.0。 

发酵条件为：发酵温度为30-35℃，发酵时间为18-24小时，pH值为6.5-7.5，转速为150-250rmp，初始接种量为5-10％。 

优选地，发酵条件为：发酵温度为30℃，发酵时间为20小时，pH值为7.0，转速为200rmp，初始接种量为8％。 

发酵完成后，培养液过滤，喷雾干燥即得菌粉。菌粉按10¹⁰CFU/Kg添加量添加到饲料中。