[发明专利]一种用于弓形虫感染预防的免疫佐剂及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种免疫佐剂，具体地，涉及一种用于弓形虫感染预防的免疫佐剂及其应用。

背景技术

弓形虫（T.gondii）广泛寄生于多种哺乳动物的有核细胞内，是一种重要的人兽共患性寄生虫病病原，具有发病率高、危害严重的流行病学特点。婴幼儿、孕妇或免疫低下者感染，可引发流产、畸胎或急性获得性弓形虫病等。艾滋病又名获得性免疫缺陷综合征（AIDS），研究发现10%～30%艾滋病患者并发弓形虫脑炎，是艾滋病患者死亡的主要原因之一。鉴于药物治疗弓形虫病能力有限且毒副作用大的特点，研制疫苗尤其是DNA疫苗已逐渐成为一种较为有效的举措。从1990年Wolff等发现小鼠肌注外源性重组质粒，质粒被摄取并表达出编码蛋白时起，重组质粒的数量和种类已举不胜举，其中近些年，弓形虫重组质粒包括ROP13，ROP16，ROP18，MIC6，MIC8等先后被评价。结果发现，除少数个别基因（如ROP18等）免疫效果较好外，其他重组疫苗均有不理想的特征。为了增强免疫效果，提高免疫保护率，免疫佐剂的研制将成为一个重要的研究课题。按照是否具有免疫原性，免疫佐剂可分为两大类，即具备免疫原性的佐剂如卡介苗，细胞因子等，和不具备免疫原性的佐剂如铝盐佐剂等，或两者的混合形式。其中，白细胞介素（IL）是一种常见的免疫佐剂。

IL15是Grabstein于1994年从猿肾上皮细胞系CV-1/EBNA的培养上清液中发现的，它是一种重要的免疫调节因子，属于IL2家族，主要由单核细胞、吞噬细胞和树突状细胞等白细胞产生，能维持依赖IL-2的CTLL细胞系的增殖，同时对CD8⁺ T细胞、NK细胞、巨噬细胞等免疫细胞的发育及内环境稳态至关重要。IL15分子包含Cys-35-Cys-85和Cys-42-Cys-88两个二硫键，三级结构含有4个螺旋和3个连接环。IL15受体（IL15R）由3个亚基组成，β、γ亚基与IL2R相同，α亚基为IL15独有。在慢性淋巴细胞白血病（CLL）中，IL15引起由IgM交叉耦合诱导的细胞增殖并抑制细胞凋亡，还可增加Shc和 ERK1/2的磷酸化作用，而IL21促进细胞凋亡且不能引起CLL细胞的增殖。

IL21是Parrish-Novak首次发现的，属于I型细胞因子，亦是IL-2家族成员。人IL21基因与IL2、IL15定位于同一条染色体上，位于4q26-q27，距IL-2基因大约180 kb，相距IL15则较远，与IL2、IL4、IL15有较高的同源性，鼠IL21与人的IL21有57%的同源性。IL21包含4个螺旋，与IL15有两对相同的Cys位点残基：一对是在IL21和IL15中特有的, 另一对在IL2、IL4和GM-CSF中也有表达。IL21具有很强的免疫刺激作用，特别是能够增强并维持CD8⁺ T细胞应答，已经被证明是很好的免疫增强因子。IL21的信号传导是由IL21受体与IL2受体家族共同的γc受体组成的异二聚体受体介导的。IL21是启动先天性和适应性免疫应答的辅助细胞因子, 并导致免疫应答进一步放大。IL21对机体的细胞免疫和体液免疫具有广泛的调节作用，它可调节T细胞、B细胞、NK细胞和DC细胞的分化和增殖，其中最显著的特征是能持续增强效应T细胞及活化NK细胞的功能，在促进机体由先天性免疫向获得性免疫的转变中起着关键作用。IL21对B细胞的调节主要表现为促进B细胞向浆细胞分化，调节免疫球蛋白的产生。IL21具有增强免疫激活、促进CTL应答和维持记忆性T细胞应答的能力，使其成为癌症免疫治疗最具潜力的候选药物之一。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有的缺陷，提供了一种用于弓形虫感染预防的免疫佐剂及其应用。

为了解决上述技术问题，本发明提供了如下的技术方案：

一种用于弓形虫感染预防的免疫佐剂，它是以pVAX1质粒作为载体、融合白细胞介素IL21和IL15的重组质粒pVAX-IL21-IL15，其碱基序列如SEQ ID NO: 1所示。

本发明的用于弓形虫感染预防的免疫佐剂在提升MIC8基因免疫效果中的应用。

本发明的用于弓形虫感染预防的免疫佐剂在增强弓形虫免疫预防疫苗效果中的应用。

本发明的用于弓形虫感染预防的免疫佐剂在制备弓形虫免疫预防疫苗中的应用。

以下为本发明的实验内容：

参照弓形虫MIC8基因序列，设计了扩增弓形虫MIC8基因的引物序列。包括：

F_MIC8：5′-CGCGGATCCATGAAGGCCAATCGAATATGGTG-3′；