[发明专利]基于精密肝切片技术的鱼类新鲜肝组织的固定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种鱼类新鲜肝组织的固定方法，特别涉及一种基于精密肝切片技术的鱼类新鲜肝组织的固定方法。

背景技术

精密肝切片(precision-cutliverslices:PCLS)技术介于器官与细胞水平之间,其获得不需要用胶原酶，切片技术相对简单，能够保存正常组织结构、细胞联系及细胞极性，精密肝切片培养系统在预测药物的体内代谢和毒性方面要优越于体外肝细胞培养法。该技术已成为研究药物代谢、转化及毒性的一种良好的体外实验模型，目前，精密肝切片技术已广泛应用于科学研究当中，但在水产研究方面应用研究较少。

由于鱼类肝组织比较软，直接将其固定到振荡切片机上面进行操作很困难，影响了精密肝切片技术的发展，因此需要一种既保证肝组织的完整性，又能保证该技术顺利进行的好方法。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种基于精密肝切片技术的鱼类新鲜肝组织的固定方法，其可以对鱼类新鲜肝组织进行固定，方便进行精密肝切片操作。

为解决上述技术问题，本发明提供一种基于精密肝切片技术的鱼类新鲜肝组织的固定方法,其包括：配置浓度为10-50g/L的琼脂糖溶液；将所述琼脂糖溶液放置于规则形状的容器中；待所述琼脂糖溶液的温度为降至10-60度时，将采集的鱼类新鲜肝组织放置于所述琼脂糖溶液中；待所述琼脂糖溶液完全凝固。

在一个进一步的实施例中，待所述琼脂糖溶液完全凝固后，将其放置于振荡切片机中进行切片。

在一个进一步的实施例中，配置琼脂糖溶液的最佳浓度为30g/L，如果浓度过高如低熔点琼脂糖的浓度为5%，会造成低熔点琼脂糖还没等降低温度到30度就已经发生凝固现象，同时在高温度下进行切片工作，会造成新鲜肝组织的死亡，影响了实验的进行；如果浓度过低如低熔点琼脂糖的浓度为1%，虽然温度30度会控制好，但是由于浓度低，造成固定新鲜组织的外表不够坚硬结实，在切片过程中会发生撕裂现象，使切片工作失败。

在一个进一步的实施例中，将采集的鱼类新鲜肝组织放置于所述琼脂糖溶液中的所述琼脂糖溶液的最佳温度为30度。如果温度过高达到60度，会造成新鲜肝组织的死亡；相反，如果温度过低达到10度，没有接近鱼类在体时的温度，也会使肝组织的活性受到一定影响，影响了实验数据的准确性。

在一个进一步的实施例中，所述规则形状的容器为细胞培养板或者正方形容器。

在一个进一步的实施例中，配置浓度为30g/L的琼脂糖溶液的具体步骤为：称取3g的琼脂糖，将其放入装有100ml蒸馏水的烧杯中；对所述烧杯进行加热，使所述琼脂糖完全溶解。

在一个进一步的实施例中，所述鱼类新鲜肝脏组织为建鲤新鲜肝脏组织。

与现有技术相比，本发明利用低熔点琼脂糖溶液的凝固特性，对鱼类新鲜肝组织进行固定,此方法不仅保证了鱼类新鲜肝组织的活性,而且可以保证精密肝切片操作顺利进行。

具体实施方式

为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。此处所称的“一个实施例”或“实施例”是指可包含于本发明至少一个实现方式中的特定特征或特性。在本说明书中不同地方出现的“在一个实施例中”并非均指同一个实施例，也不是单独的或选择性的与其他实施例互相排斥的实施例。

实施例一

称取1g低熔点琼脂糖，将其加入到含有100ml蒸馏水的小烧杯中，放置到电热炉或微波炉中加热煮沸使其溶解(此琼脂糖溶液的浓度为10g/L)，然后将其分装到规则形状的容器中，比如，分装到六孔细胞培养板中或自制的正方形小容器内，待温度分别降低到大约60度、30度、10度时，将新鲜采集的建鲤肝组织加入其中，等待其冷却凝固后，进行修块,放置在震荡切片机中进行切片研究。研究发现在60度时对肝组织损伤较大；30度时由于低熔点琼脂糖的浓度较低，切块时容易造成外表撕裂，不能顺利进行切片；10度时，还没等将新鲜肝组织放入，低熔点琼脂糖已经发生了凝固现象，影响后续试验的顺利进行。

实施例二

称取3g低熔点琼脂糖，将其加入到含有100ml蒸馏水的小烧杯中，放置到电热炉或微波炉中加热煮沸使其溶解(此琼脂糖溶液的浓度为30g/L)，将其分装到六孔细胞培养板中或自制的正方形小容器，待温度分别降低到大约60度、30度、10度时，将新鲜采集的建鲤肝组织加入其中，等待其冷却凝固后，放置到震荡切片机中进行切片研究。本结果发现琼脂糖溶液的浓度为30g/L在温度为30度时切出的精密肝组织切片形状良好、厚度均匀，适合后续科学研究实验。