[发明专利]基于TGF-β1的B细胞抗原表位的合成肽疫苗及其应用

说明书

技术领域

本发明属于肝纤维化的防治技术领域，涉及基于TGF-β1的B细胞抗原表位的合成肽疫苗及其应用。

背景技术

肝纤维化是多种慢性肝病向肝硬化发展必经的病理过程，是决定慢性肝病预后的最主要因素。目前，大部分慢性肝病都缺乏有效的病因治疗，而且研究证实部分肝病在病因去除后肝纤维化仍可继续进展，故阻滞或延缓肝纤维化的发生发展从而防止进展为肝硬化成为慢性肝病治疗的主要途径之一。但目前尚无真正意义上有效的抗肝纤维化药物或措施，探索安全有效的抗肝纤维化措施是目前肝病学研究领域面临的重要课题。

细胞因子疫苗是近年来疫苗学研究中的一个热点，主要是将某一疾病中起主要作用的细胞因子采用疫苗的方法主动免疫机体，诱导机体产生中和性抗体，中和该细胞因子以阻止其相应生物学功能的发挥，从而起到防治相关疾病的目的。合成肽疫苗是近年来研究较为广泛、且日渐成熟的新型疫苗之一，在稳定性、易获取性、安全性、纯化简单等方面具有明显的优势，已有大量文献报道其可行性和有效性。该疫苗不含核酸，是基于蛋白分子的抗原表位开发设计的一类疫苗，是最为理想的安全新型疫苗。

转化生长因子-β1（transforming growth factor beta，TGF-β1）是一类能够调节细胞生长和分化的多肽，具备多种生物学作用，在肝纤维化发生、发展过程中具备活化肝星状细胞，促进胶原基因表达。促进细胞外基质合成与沉积等作用，是目前已知的促肝纤维化作用最强的细胞因子。TGF-β1在肝纤维化中的作用具体表现在：

促进肝星状细胞表达和分泌Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原纤维、层粘连蛋白等多种细胞外基质成分；

抑制细胞外基质中蛋白酶的活性，如对基质金属蛋白酶和组织纤溶酶原激活物的表达有抑制作用，抑制细胞外基质的降解；

增强某些细胞因子如血小板生长因子mRNA的表达；

对成纤维细胞、单核细胞具有趋化作用；

通过自分泌作用促进TGF-β1自身的表达。

TGFβ1在肝纤维化发生发展过程中的关键作用已经得到研究者们的公认，针对TGFβ1的抗肝纤维化研究也成为抗肝纤维化研究的热点和极有应用前景的研究之一。目前面临的主要问题是探索安全有效的阻断TGFβ1措施。已有报道用TGFβ1抗体、可溶性TGFβ1受体及腺病毒介导截短的TGFβⅡ型受体等通过中和作用使肝纤维化时过量产生的TGFβ1降低，在动物实验中显示了显著的抗肝纤维化作用及减少肝细胞凋亡作用，且未发现有明显的肝脏局部或全身副作用。与肝纤维化有相似发生机理的肺、肾、心等器官纤维化的研究也得出类似结论。但从临床应用的角度来讲，以上方法都具有制备方法复杂、需反复多次给药、使用不便等突出缺点，应用前景欠佳。寻找更为方便有效地阻断TGFβ1的手段是目前亟待解决的问题之一。

发明内容

本发明解决的问题在于提供基于TGF-β1的B细胞抗原表位的合成肽疫苗及其应用，通过诱导机体产生抗TGF-β1的抗体，以中和TGF-β1在肝纤维化过程中的促进作用，达到抑制肝纤维化进程的目的。

本发明是通过以下技术方案来实现：

一种TGF-β1的B细胞抗原表位，包括：

氨基酸残基序列如SEQ.ID.NO.1所示的AY25表位；

氨基酸残基序列如SEQ.ID.NO.2所示的LS30表位。

一种合成肽疫苗，包括TGF-β1的B细胞抗原表位，并将其偶联在载体蛋白上；

所示的抗原表位为如SEQ.ID.NO.1所示的AY25表位，或如SEQ.ID.NO.2所示的LS30表位。

所述的载体蛋白为BSA或KLH。

所述的合成肽疫苗在制备抗TGF-β1的抗体中的应用。

所述的合成肽疫苗在制备抗肝纤维化的药物中的应用。

所述的药物为抑制或拮抗TGF-β1B活性的药物。

所述的药物为抑制肝细胞凋亡的药物。

与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：

本发明提供的TGF-β1的B细胞抗原表位，采用化学方法合成其多肽序列，制备偶联肽疫苗，通过腹腔注射的方法免疫小鼠，诱导小鼠机体产生相应的抗体，并通过CCl₄构建肝纤维化模型，以观察所产生的抗TGF-β1抗体能否中和TGF-β1以达到抗肝纤维化的作用。