[发明专利]线虫急性毒理试验直观观测培养基及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种毒理试验直观观测培养基及其制备方法。

背景技术

线虫属于线形动物门(Nematoda)，种类繁多，数量丰富，是态系统重要的生态因子，被广泛用作生态环境健康评价的敏感性指示生物。线虫能够较灵敏地感受周围环境变化，其生活史周期短，可在短时间内对环境变化产生指示作用。一些易于培养、保存的线虫种属如秀丽隐杆线虫Caenorhabditis elegans，已被广泛用作模式生物，在毒理学等实验科学中进行环境科学、生命科学等领域的研究。由于线虫生活周期短和寿命短的特点，线虫更多的用于24h或更短时间的急性毒理试验中。

进行毒理学试验的线虫载体一般是琼脂培养基或者是受试液体。线虫身体透明，体长一般在1mm左右，在显微镜下可见。经典毒理学指标包括死亡率、行为变化等，这些指标都要求对试验线虫进行死亡判定、计数以及行为观测等。其中线虫死亡的判定，需要借助工具，若碰触无反应则界定为死亡，奄奄一息的线虫往往对这种碰触无反应，使得死亡虫数虚高；而碰触后的虫体受损，无法进行后继的生理生化分析。

在传统的培养基中，线虫与琼脂、水液等培养基质颜色相近，不利计数和观测；线虫常常会有钻入琼脂胶中的情况，出现丢虫现象，这增加了计数和行为判断的难度；显微镜下观测水液中线虫往往有波动水纹，出现漏查，这会影响对线虫计数的准确，特别是虫体随水晃动，而无法判断线虫是否死亡。一般对毒理试验中常用的一个胁迫下10条虫子的死亡鉴定，至少需要5min，虫子由于钻入琼脂胶中无法发现，使得总数往往低于10条。而对其进行行为测量，更是可能高达0.5h。因此传统培养基使得毒理试验中线虫观测费力误时，效率极低，也使得试验结果的准确度和精确度有所下降。

发明内容

本发明是要解决传统的线虫毒理试验培养基底计数不准确、死亡判断误差大、观测时间长、行为观测不精准的问题，提供线虫急性毒理试验直观观测培养基及其制备方法。

本发明线虫急性毒理试验直观观测培养基按质量百分比由45％～60％的石膏、5％～10％的活性炭和余量的蒸馏水制成。

上述线虫急性毒理试验直观观测培养基的制备方法，按以下步骤进行：

一、按质量百分比称取45％～60％的石膏、5％～10％的活性炭和余量的蒸馏水；二、将步骤一称取的石膏和活性炭混合均匀，然后倒入蒸馏水中，搅拌均匀，得混合物；三、将混合物倒于12孔细胞培养板中，厚度为0.1～0.2cm；四、静置于水平台上至凝固，即得到线虫急性毒理试验直观观测培养基。

本发明的有益效果：

1、本发明的培养基具有由活性炭显色的黑色培养基底，与现有的琼脂、水液等与线虫体色近似的培养基底相比，线虫显而易见，观测更为方便；

2、活线虫在石膏和活性炭混合基底上表现为垂直站立和剧烈摆尾行为，而死亡线虫无站立和摆动，这使得对线虫计数和死亡判定直观可见，不会出现丢虫、漏虫现象，观测时间缩短为1min以内，效率明显提高，试验结果的准确度和精确度也获得提升；

3、与琼脂、水液培养基相比，使用本发明的培养基进行急性毒理试验，线虫的存活和行为等没有差异，即本发明的培养基没有对线虫的存活和行为产生影响。

本发明解决了传统的线虫毒理试验培养基底计数不准确、死亡判断误差大、观测时间长、行为观测不精准等问题。利用本发明的培养基进行线虫毒理试验，易于计数，死虫判定显见，易于进行行为观测，试验结果准确度和精确度都有所提高；由于对虫体无触碰伤损，便可对这些进行常规毒理试验的线虫，进行进一步的生理生化分析。本发明的线虫毒理直观高效观测培养基，使得利用线虫进行快速的生物监测加以评价生态风险和环境健康成为可能。

具体实施方式

本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。

具体实施方式一：本实施方式线虫急性毒理试验直观观测培养基按质量百分比由45％～60％的石膏、5％～10％的活性炭和余量的蒸馏水制成。

具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是：线虫急性毒理试验直观观测培养基按质量百分比由50％～55％的石膏、7％～8％的活性炭和余量的蒸馏水制成。

具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一不同的是：线虫急性毒理试验直观观测培养基按质量百分比由50％的石膏、8％的活性炭和余量的蒸馏水制成。

具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一不同的是：线虫急性毒理试验直观观测培养基按质量百分比由55％的石膏、9％的活性炭和余量的蒸馏水制成。