[发明专利]一种基于纳米金和氧化石墨烯的双信号放大ELISA检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种纳米金和氧化石墨烯的新用途，特别涉及一种纳米金和氧化石墨烯在放大ELISA检测信号中的应用。

背景技术

酶联接免疫吸附剂测定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是各生物、化学实验室以及临床检测中常用的分析检测方法。ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。但是昂贵的抗体价格和非足够低的检测限已不能满足当前实际应用的要求。

目前，纳米材料在各领域的应用较为广泛，尤其是纳米金的应用多年来一直得到大家的认可。纳米金即指金的微小颗粒，其直径在1～100nm，具有高电子密度、介电特性和催化作用，能与多种生物大分子结合，且不影响其生物活性。

氧化石墨烯是近几年才被大家关注的，在材料学领域得到了越来越广泛的应用，但是其在生命科学领域的应用还鲜有报道。

目前尚未有将纳米金和氧化石墨烯同时用于ELISA检测中的相关报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种纳米金和氧化石墨烯的新用途。

本发明所提供的纳米金和氧化石墨烯的新用途，具体为纳米金和氧化石墨烯在放大ELISA检测信号中的应用。所述ELISA检测信号的放大可理解为在相同的检测条件下，反应结束后反应液颜色更深，或OD值更大，可进一步理解为检测灵敏度的提高。

在所述应用中，所述纳米金的颗粒直径可为10－100nm，如10-20nm。在本发明的一个实施例中，所述纳米金的颗粒直径具体为16nm。所述氧化石墨烯为单原子层结构。

本发明的另一个目的是提供一种ELISA检测方法。

本发明所提供的ELISA检测方法，依次包括如下步骤：

（1）向载有包被原的酶标板中加入能与所述包被原特异结合的待测物质；

（2）向所述酶标板中加入纳米金标记物；所述纳米金标记物为将纳米金与蛋白甲和蛋白乙结合所得的物质；所述蛋白甲是与所述待测物质特异结合的蛋白，所述蛋白乙是与所述待测物质不结合的蛋白；

（3）向所述酶标板中加入氧化石墨烯标记物；所述氧化石墨烯标记物为将氧化石墨烯与蛋白丙结合所得的物质；所述蛋白丙为与所述蛋白甲和所述蛋白乙结合的另一种蛋白。

所述方法中，在步骤（1）、（2）和（3）之后均包括用洗涤液进行洗涤的步骤；所述洗涤液为ELISA检测常用洗涤液。在步骤（3）后还包括加入显色液进行显色反应，以及加入终止液进行终止反应的步骤。在本发明的一个实施例中，所述显色液具体为TMB，所述终止液为2M硫酸。

所述方法中，所述纳米金的颗粒直径可为10－100nm。在本发明的一个实施例中，所述纳米金的颗粒直径具体为16nm。所述氧化石墨烯为单原子层结构。

所述方法中，各蛋白均为ELISA检测中所涉及的抗原或抗体，当然所述抗原也包括半抗原与载体蛋白的偶联物。

在本发明中，所述ELISA检测方法具体为改良的双抗夹心法，相应的，所述包被原为抗体；所述待测物质为与所述包被原特异结合的抗原；所述蛋白甲为与所述待测物质特异结合的一抗，所述蛋白乙为与所述待测物质不结合的一抗；所述蛋白丙为抗所述蛋白甲和所述蛋白乙的酶标二抗。