[发明专利]纯化抗体的方法

说明书

一种纯化抗体组合物的方法，其包括在纯化过程后期应用阴离子交换色谱。对经超滤/渗滤纯化的抗体组合物进行阴离子交换色谱(AEX)以形成药学纯的抗体组合物。

技术领域

本发明涉及纯化抗体的方法。特别地，所述方法包括在抗体纯化过程的后期使用阴离子交换色谱。

背景技术

单克隆抗体(monoclonal antibody，mAb)是医药工业中最重要的药剂之一。mAb一般使用培养的细胞产生，其中通常使用哺乳动物细胞以确保获得期望的折叠和糖基化。在过去十年内，细胞培养技术已进行了改进，包括生产培养基和给料策略的进步。这些改进已导致高的细胞培养物效价。但是，通常需要将表达的抗体与宿主细胞和表达培养基中的其它组分(杂质)分离以用于其预期的目的。

由于mAb一般通过发酵产生，因此它们伴随有大量的过程相关的杂质，例如宿主细胞蛋白质(HCP)、宿主细胞DNA和培养基成分。例如，哺乳动物细胞对由剪切应力引起的破坏敏感，并且这可导致杂质(例如蛋白酶(即HCP))的释放，其可影响产品稳定性和/或纯度。特别地，HCP是一种重要的污染物，因为其可在低的百万分率(parts per million)水平下引起免疫应答。根据发酵条件，产品相关的杂质(例如降解的、截短的和聚集的mAb)也可见于细胞培养物上清中。因此，从细胞培养基中有效回收和纯化抗体是抗体纯化过程的一个重要部分，特别是在医药应用中。

目前，mAb纯化过程一般包括色谱精制(polishing)步骤，其目标是减少/除去产品相关的以及过程相关的杂质，例如HCP和DNA、高分子量(molecular weight，MW)聚集体、低MW降解产物和渗出物(leachables)。可将纯化过程分解成一系列单元操作，但是所述操作(和其中的步骤)可同时或相继发生。常用的涵盖广泛抗体和条件的基于蛋白A的抗体纯化过程包括下述单元操作：蛋白A捕获→低pH病毒灭活→离子交换色谱(IEX)精制(一般是两个离子交换色谱，接着进行阴离子交换色谱)→病毒过滤→以及最后的超滤-渗滤(UF/DF)。抗体纯化技术的更多细节可见于由Uwe Gottschalk编辑的Process Scale Purificationof Antibodies，John WileySons，Inc.2009中。最后的UF/DF步骤被认为完成了纯化，并将抗体置于适于终端用途(end-use)应用的组合物中，例如大量填充(bulk fill)和完成、用于医药应用、体内测试、临床用途等的冷冻干燥。

因此，期望提供一种替代的纯化过程来纯化抗体组合物。

发明内容

本发明基于以下发现：常规的抗体纯化过程不如先前认为的那样有效，特别是对于HCP，而在纯化过程后期使用阴离子交换色谱(AEX)可改进纯化过程和/或提供更高质量的抗体组合物。因此，本发明的第一方面涉及纯化抗体组合物的方法，其包括对经UF/DF纯化的抗体组合物进行阴离子交换色谱(AEX)以形成药学纯(pharmaceutically pure)的抗体组合物。此处的“药学纯”在下文中有定义。经UF/DF纯化的抗体组合物的抗体浓度一般为至少1mg/ml，例如至少5mg/ml、至少10mg/ml、5mg/ml至250mg/ml、10mg/ml至150mg/ml、15mg/ml至100mg/ml、20mg/ml至50mg/ml和30mg/ml至35mg/ml。经UF/DF纯化的抗体组合物一般通过对部分纯化的抗体组合物进行UF/DF获得。所述部分纯化的抗体组合物可通过捕获和/或精制步骤形成。

本发明的另一方面涉及纯化抗体组合物的方法，其包括：对抗体细胞培养收获物经进行例如蛋白A色谱的亲和色谱以捕获粗制的抗体组合物；对所述粗制的抗体组合物进行至少一个精制步骤以形成部分纯化的抗体组合物；对所述部分纯化的抗体组合物进行UF/DF步骤以形成经UF/DF纯化的抗体组合物；以及对所述经UF/DF纯化的抗体组合物进行阴离子交换色谱(AEX)以形成药学纯的抗体组合物。所述精制步骤通常为阳离子交换色谱，以及任选的随后的阴离子交换色谱。