[发明专利]用于使用酶法对糖化血红蛋白进行定量分析的溶血试剂组合物

说明书

技术领域

本发明涉及新型溶血试剂组合物，所述组合物用于使用酶法对糖化血红蛋白进行的定量分析。

背景技术

近年来，为了诊断和预防糖尿病，血糖水平周期性检查的必要性日益受到关注。使用便携式血糖监测设备、特别是使用带型(strip type)生物传感器，各个体可容易地测定血糖水平。

然而，由于血糖测定结果根据患者是否已经进食而变化，并且，所测定的值可能随患者在检查日的身体状况(例如，压力、饮酒和疲劳等)而变化，因此，所述装置并不便于使用。

相比之下，当使用糖化血红蛋白对糖尿病患者进行测定和管理时，结果并不会受到如患者身体状况或患者是否已进食的因素的影响。通常认为，糖化血红蛋白的值反映了约3至4个月时间段的平均血糖水平，因此，可用作评价患者管理血糖水平的方法的效力的指标。这是因为存在于血液中的葡萄糖与血红蛋白(血液组成蛋白)反应了一段长的时间，进行Amadori重排，形成了血红蛋白-葡萄糖的修饰蛋白，即所谓的糖化血红蛋白(HbA1c)。糖化血红蛋白的结构如下所示。

由于这样形成的糖化血红蛋白的生命周期为约90至120天，基于3-4个月的平均血糖水平，它可为患者的糖尿病诊断、或患者血糖管理的效力提供非常重要的数据。

通过以百分比计的、相对于总血红蛋白浓度而言的糖化血红蛋白比率，测定对糖化血红蛋白的临床评价。认为6.0％以下的糖化血红蛋白值是正常的。在糖尿病并发症的管理中，糖化血红蛋白值是非常重要的因素。据报道，例如，当糖化血红蛋白值下降1％时，具有以下作用：心肌梗死风险降低14％、白内障风险降低19％、微血管病风险降低37％、外周动脉疾病风险降低43％、糖尿病死亡风险降低21％等。

尽管患者血糖水平的常规测定对于患者日常健康状况的检查以及相应地为患者提供适当的治疗而言非常重要，但是为了确定患者的长期血糖管理状况、防止并发症、并为患者提供适当的治疗，仍然需要测定患者的糖化蛋白或糖化血红蛋白水平。

测定血液中的糖化血红蛋白水平(用作血糖管理中的重要指标)的标准方法可包括如下步骤：通过将收集的血液样品与合适的试剂(例如，如TX-100的表面活性剂)进行混合，使所述血液样品发生溶血，使所述血液样品穿过用珠/凝胶填充的HPLC离子交换柱或亲和柱(所述珠/凝胶具有硼酸衍生物官能团表面)，通过可见光测定除正常蛋白以外的、由此分离的蛋白的特定波长，从而计算糖化蛋白的比率。

然而，上述标准方法具有以下缺点：所述方法仅能在设备完善的专业临床实验室或医院的中心实验室由训练过的临床专业人员实施，并且操作和维护相对较贵(尤其是当安排较少的测试时)。

此外，可使用糖化血红蛋白抗体对血液糖化血红蛋白水平进行测定。然而，由于缺少生产糖化血红蛋白抗体的公司，因此供给量非常有限。并且，由于需要反应-分离步骤，设备也非常复杂。

美国专利号5,541,117公开了如下方法：制备在其上偶联有抗体的垫料(pad)，使血液样品发生溶血并将引入至所述垫料上，其后，经反射光度法确定血红蛋白含量。然而，该方法的缺点包括：使用高成本的抗体，并且由于多孔垫料的不均匀性，难以制造品质一致的传感器。此外，在通过抗体修饰的固相分离样品中的蛋白后，使用标记化合物以电化学方法确定糖化蛋白的相对量。然而，糖化蛋白和糖化蛋白标记物复合体竞争性地聚集在电极表面周围，并且来自标记物与注射底物之间的电化学反应的信号大量地被抑制。因此，危及了糖化蛋白质的测定，并且操作的可重复性受到损害。

可选的是，可将酶法用于测定糖化蛋白质(如糖化血红蛋白)的浓度。所述酶法包括：向给定样品的糖化蛋白中引入蛋白酶，进行预处理以释放糖化肽或糖化氨基酸，将所述糖化肽或糖化氨基酸用作下述反应的底物，通过糖化肽-特异性酶或糖化氨基酸-特异性酶(例如，果糖基肽氧化酶或果糖基氨基酸氧化酶)在所分离的底物上起作用，产生中间产物(例如，过氧化氢)，随后通过与适当的显色剂(例如，可检测的产物)进行过氧化物酶-过氧化氢反应产生信号。

日本专利申请公开号H5-192193公开了通过特异性地识别存在于果糖胺中的酮胺结构，对果糖胺具体定量的方法：从各种微生物中分离酮胺氧化酶(催化酮胺结构氧化的新型酶)，在酮胺氧化酶存在的情况下，仅氧化经蛋白酶预处理过的果糖胺，测定所得产物(即，葡糖醛酮或过氧化氢)。