[发明专利]超载和洗脱层析

权利要求书

1.用于从包含多肽和一种或多种污染物的组合物中纯化多肽的方法，所述方法包括

a)以超过层析材料对于多肽的动态结合容量的量将组合物装载到层析材料上，

b)在一种或多种污染物仍然与层析材料结合的条件下，从层析材料上洗脱多肽，和

c)混合包含步骤a)和b)的层析流出液中的多肽的级分。

2.权利要求1的方法，其中多肽是抗体或免疫粘附素。

3.权利要求2的方法，其中多肽是免疫粘附素。

4.权利要求2的方法，其中多肽是抗体。

5.权利要求4的方法，其中抗体是单克隆抗体。

6.权利要求5的方法，其中单克隆抗体是嵌合抗体、人源化抗体，或人抗体。

7.权利要求5的方法，其中单克隆抗体是IgG单克隆抗体。

8.权利要求4的方法，其中抗体是抗原结合片段。

9.权利要求8的方法，其中抗原结合片段是Fab片段、Fab’片段、F(ab’)₂片段、scFv、di-scFv、bi-scFv、串联(di,tri)-scFv、Fv、sdAb、三功能抗体、BiTE、双抗体或三价抗体。

10.权利要求1的方法，其中多肽是酶、激素、融合蛋白、含有Fc的蛋白质、免疫缀合物、细胞因子或白介素。

11.权利要求1-10中任一项的方法，其中至少一种污染物是中华仓鼠卵巢蛋白(CHOP)、宿主细胞蛋白(HCP)、泄露的蛋白A、羧肽酶B、核酸、DNA、产物变体、聚集的蛋白质、细胞培养基组分、庆大霉素、多肽片段、内毒素和病毒性污染物中的任何一种或多种。

12.权利要求1-11中任一项的方法，其中层析材料是混合模式材料、阴离子交换材料、疏水性相互作用材料，或亲和材料。

13.权利要求1-12中任一项的方法，其中装载密度在约50g/L至约2000g/L之间。

14.权利要求13的方法，其中装载密度在约200g/L至约1000g/L之间。

15.权利要求1-14中任一项的方法，其中以约层析材料对于一种或多种污染物的动态结合容量将组合物装载到层析材料上。

16.权利要求1-15中任一项的方法，其中以层析材料对于多肽的动态结合容量的20倍将组合物装载到层析材料上。

17.权利要求1-16中任一项的方法，其中层析材料对多肽的分配系数大于30。

18.权利要求17的方法，其中层析材料对多肽的分配系数大于100。

19.权利要求1-18中任一项的方法，其中方法还包括使用装载缓冲液和洗脱缓冲液。

20.权利要求19的方法，其中洗脱缓冲液具有小于装载缓冲液的电导率的电导率。

21.权利要求20的方法，其中装载缓冲液具有约4.0mS至约7.0mS的电导率。

22.权利要求20的方法，其中洗脱缓冲液具有约0.0mS至约7.0mS的电导率。

23.权利要求19的方法，其中洗脱缓冲液具有大于装载缓冲液的电导率的电导率。

24.权利要求23的方法，其中装载缓冲液具有约4.0mS至约10.0mS的电导率。

25.权利要求23的方法，其中装载缓冲液具有约4.0mS至约7.0mS的电导率。

26.权利要求23的方法，其中洗脱缓冲液具有约5.5mS至约17.0mS的电导率。

27.权利要求19的方法，其中洗脱缓冲液的电导率在约10倍柱体积(CV)中以从约5.5mS至约1.0mS的梯度减少。

28.权利要求19的方法，其中洗脱缓冲液的电导率在约15CV中以从约5.5mS至约1.0mS的梯度减少。

29.权利要求19的方法，其中洗脱缓冲液的电导率在约5CV中以从约10.0mS至约1.0mS的梯度减少。