[发明专利]产生人乳寡糖(HMO)或其前体的方法

权利要求书

1.一种制备一种或多种人乳寡糖(HMO)或其衍生物或前体的方法，所述方法包括以下步骤：

a)提供选自由式5～10中任一式的化合物及其盐组成的组的至少一种供体：

其中，X选自由叠氮基、氟、可选地具有取代基的苯氧基、可选地具有取代基的吡啶基氧基、基团A、基团B、基团C和基团D组成的组：

其中，R_a独立地为H或烷基，或者两个相邻的R_a基表示=C(R_b)₂基团，其中，R_b独立地为H或烷基；R_c独立地选自由烷氧基、氨基、烷基氨基和二烷基氨基组成的组；R_d选自由H、烷基和-C(=O)R_e组成的组，其中R_e为OH、烷氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、肼基、烷基肼基、二烷基肼基或三烷基肼基；

b)提供选自由以下物质组成的组的至少一种受体：

-乳糖

-下式的乳糖衍生物：

其中，R是能够被氢解除去的基团，

-LNT：

-下式的LNT衍生物或其盐：

其中，R是能够被氢解除去的基团，

-LNnT：

-下式的LNnT衍生物或其盐：

其中，R是能够被氢解除去的基团，

c)提供具有转糖苷酶活性和/或糖苷合酶活性的至少一种酶；

d)制备步骤a)、b)和c)中所提供的所述至少一种供体、至少一种受体和至少一种酶的混合物；

e)温育按照步骤d)制得的混合物；

f)在以下情况下重复进行步骤a)～c)中的至少一步并随后重复进行步骤d)和步骤e)：

f-a)在步骤a)中提供了单一的式5的化合物供体，按照步骤b)提供了单一受体，步骤c)中添加的具有转糖苷酶活性和/或糖苷合酶活性的酶是具有转岩藻糖苷酶和/或岩藻糖苷合酶活性的酶，且步骤e)的结果是制得了单一的HMO或其衍生物或前体；或

f-b)在步骤a)中提供了单一的式6的化合物供体，按照步骤b)提供了单一受体，步骤c)中添加的具有转糖苷酶活性和/或糖苷合酶活性的酶是具有转唾液酸酶活性的酶，且步骤e)的结果是制得了单一的HMO或其衍生物或前体；或

f-c)在步骤a)中提供了单一的式8的化合物供体，按照步骤b)提供了单一受体，步骤c)中添加的具有转糖苷酶活性和/或糖苷合酶活性的酶是具有转乳-N-二糖苷酶活性的酶，且步骤e)的结果是制得了单一的HMO或其衍生物或前体；

g)可选地对按照步骤e)或f)获得的混合物重复进行步骤a)～c)中的至少一步并随后重复进行步骤d)和步骤e)；

h)可选地使经步骤e)、f)或g)后得到的混合物进行氢解反应。

2.如权利要求1所述的方法，其中，步骤f)包括：

当在步骤a)中提供了单一供体，按照步骤b)提供了单一受体，步骤c)中添加了单一的具有转糖苷酶活性和/或糖苷合酶活性的酶，且步骤e)的结果是制得了单一的HMO或其衍生物或前体时，在这种情况下，重复进行步骤a)～c)中的至少一步并随后重复进行步骤d)和步骤e)。

3.如权利要求1所述的方法，其中，步骤f)包括：

在步骤e)的结果是制得了单一的HMO或其衍生物或前体的情况下，重复进行步骤a)～c)中的任一步并随后重复进行步骤d)和步骤e)。

4.如权利要求1～3中任一项所述的方法，其中，在步骤a)中提供两种、三种、四种、五种、一至五种、三至十种、五至十种或更多种不同的供体。

5.如权利要求1～4中任一项所述的方法，其中，在步骤b)中提供两种、三种、四种、五种、一至五种、三至十种、五至十种或更多种不同的受体。

6.如权利要求1～5中任一项所述的方法，其中，在步骤c)中提供两种、三种、四种、五种、一至五种、三至十种、五至十种或更多种不同的酶。

7.如权利要求1～6中任一项所述的方法，其中，所述化合物或酶为同时加入或依次加入。