[发明专利]诊断和治疗方法

说明书

发明领域

本发明涉及治疗或预防甲状腺素运载蛋白淀粉状变性的方法，用于所述治疗或预防的药物组合物，以及诊断方法和试剂盒。

发明背景

甲状腺素运载蛋白(TTR)是由4个14kDa的亚基组成的功能性血浆蛋白。TTR主要由肝脏合成，作为视黄醇和甲状腺素的转运蛋白发挥功能。除了它的生理学功能外，还发现TTR是若干种不同临床形式的淀粉状变性中的淀粉状蛋白原纤维的主要成分，包括家族性淀粉样多神经病(FAP)、家族性心脏淀粉状变性和散发的老年全身性淀粉状变性(SSA)。SSA是由于野生型(WT)TTR原纤维选择性沉积在心脏组织中导致的，影响几乎25％的80岁以上群体。

已经关联了约100种TTR的氨基酸突变与TTR淀粉状变性的家族性形式。研究显示：TTR通过由四聚体去稳定化起始的过程，形成淀粉状蛋白。去稳定化导致单体积累，后者可以错误折叠并聚集成原纤维结构。已投入了大量精力研究与疾病的家族性形式相关的TTR突变的淀粉状蛋白生成，但大部分TTR相关的淀粉状变性表现为由其他情况下稳定的WT蛋白质的聚集和沉积导致的散发病例。

硫酸乙酰肝素(HS)——由重复的葡萄糖胺和葡萄糖醛酸单元组成的硫酸化多糖，与多种淀粉状变性中淀粉样沉积相关。虽然不断积累的证据提示HS在淀粉样沉积中发挥重要的作用，但仍未明确HS在淀粉状变性的病理学中的确切作用。

因此，本领域仍然需要详细阐述HS在TTR淀粉状变性中的作用，以及开发其药物。

发明简述

本发明是基于这样的研究，其中通过免疫组化染色检测到HS与TTR在心肌病心脏中的共沉积。体外研究揭示，HS和肝素促进了TTR原纤维生成，这是与多糖硫酸化程度相关的效应，并通过TTR上的特异性结合序列实现。在表达人TTR的果蝇(Drosophila)模型中进一步检验了该促进效应。因此，TTR与肝素／HS的相互作用是尺寸依赖性和选择性的，对具有更高程度硫酸化的多糖是优先的。

本发明提供了诊断TTR淀粉状变性的方法。方法包括步骤：(a)提供人对象的体液样品，(b)确定所述体液中的TTR浓度，(c)如果步骤(b)中的确定的TTR浓度高于对照样品，则确定所述人对象患有TTR淀粉状变性或处于发展TTR淀粉状变性的高风险。

本发明还提供了用于上述诊断方法的试剂盒，其包含抗TTR抗体，和用于检测体液样品中的TTR表达水平的一种或多种试剂。

本发明还提供了预防、减轻和／或治疗有需要的患者中的甲状腺素运载蛋白(TTR)淀粉状变性的方法，通过施用有效量的能够干扰TTR和硫酸乙酰肝素(HS)相互作用的活性剂。

此外，本发明涉及能够干扰HS和TTR之间的相互作用的活性剂的医药用途，用于预防、减轻和／或治疗TTR淀粉状变性。

本发明还提供了药物组合物，包含能够干扰HS和TTR之间的相互作用的活性剂，和可药用的载体。

所附权利要求中提出了本发明的具体实施方案。

本发明的其他目标、实施方案、细节和优点根据下列附图、详细说明和实施例是显而易见的。

附图简述

在下文中，本发明参考附图，通过优选的实施方案作出更详细的描述，其中：

图1显示了显微镜图像，证实TTR淀粉状蛋白和HS在心肌病心脏中的共定位。用刚果红对来自报道患有心肌病的70岁患者的心肌切片(15μm厚)染色，在偏振光下观察该切片(A)；相邻的切片用阿辛蓝染色(B)。(A)和(B)中的箭头表示相邻的位置。其他切片用抗TTR的抗体(C)和抗HS抗体(D)双免疫染色。荧光通道(A)和(B)的合并显示了患者标本中重叠的TTR和HS的阳性信号(E)，和年龄匹配的对照对象中的TTR的阴性染色(F)。DAPI对细胞核进行复染(蓝)。原始放大倍数：A-F：200X，比例尺：50μM。

图2证实了野生型TTR的pH依赖性原纤维化。将TTR(50μM)溶解在所示pH值的磷酸-柠檬酸缓冲液中，并在37℃温育48h。在温育后，使用ThT荧光分析样品的原纤维含量(A)。仅在pH2.7中温育的样品中检测到原纤维形成，形成量(200AU)明显小于在存在肝素条件下相同pH温育的样品(8000AU；图3A)。在上述相同的条件下温育TTR(500μM)，通过天然PAGE分析(B)。迁移到凝胶底部的强条带表示单体和二聚体。